实时荧光定量PCR扩增主要是做一些简单的、对单一退火温度的目的基因进行扩增。一次PCR扩增可以设置一系列不同的退火温度条件（温度梯度），通常为12种温度梯度的普通PCR仪。

 

　　PCR技术的本质是体外核酸扩增，加热使双链DNA解开螺旋，在退火温度条件下引物同模板DNA杂交，在TaqDNA聚合酶，dNTPs，Mg2＋和合适pH缓冲液存在条件下延伸引物，重复“变性→退火→引物延伸”过程至25～40个循环，呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。

 

　　实时荧光定量PCR扩增将具有细胞定位能力的原位杂交技术运用于从细胞内靶DNA的定位分析，在细胞内实现基因扩增的普通PCR仪。PCR扩增时加入的引物利用荧光素进行标记，使引物和荧光探针同时与模板进行特异性结合，扩增结果通过荧光信号采集系统实时采集信号并输送到计算机分析处理系统，实时输出量化结果，这样的PCR仪叫实时荧光定量PCR仪。

 

　　PCR也叫基因扩增仪，主要用于用于科研及医学临床的基因扩增、定性PCR基因扩增、荧光／酶免终点定量DNA基因扩增、基因芯片等其他基因分析应用的基因扩增等。基因扩增仪适合国内外各种PCR试剂盒传染病类、肿瘤类、科研类。进口基因扩增仪主要由外壳、变温反应腔、散热系统、加热系统、制冷系统、电子控制系统、供电系统、人机界面等各部分组成。

 

　　常见故障：

 

　　1、个别孔扩增效率差异很大，可能的原因是半导体模块出现坏点；

 

　　2、仪器工作时出现噪音；

 

　　3、荧光染料污染样品孔；

 

　　4、荧光强度减弱或不稳定，产生的原因有滤光片发霉或有水汽，或光源损耗（以卤钨灯为光源的），需更换光源；或需调节检测元件灵敏度；

 

　　5、PCR管融化，原因可能是温度传感器出问题或是热盖出问题。