磁珠提取实时荧光定量PCR是现代分子生物学研究中*的手段，是一种敏感的放大系统。相比于传统的临床诊断方法，核酸诊断是分子水平上的诊断技术，可以弥补传统临床诊断方法的某些缺陷。

 

　　磁珠提取实时荧光定量PCR不仅具有普通PCR的高灵敏性，而且由于应用了荧光探针，可以通过光电传导系统直接探测PCR扩增过程中荧光信号的变化以获得定量结果，所以还具有DNA杂交的高特异性和光谱技术的高准确性，克服了常规PCR的许多缺点。

 

　　将传统PCR检测模式中的PCR扩增和检测相结合（即在同一个密闭容器中将PCR扩增反应与荧光标记探针检测结合在一起）检测目的核酸的检验方法纷纷出台。这样的检测方法称为“实时”PCR，表示PCR扩增产物可被实时检测。

 

　　准确地说，“实时”是指在每一个PCR循环后检测扩增产物，当PCR扩增反应结束后，我们可以得到每个样品的PCR扩增产物变化曲线。通过分析这些反应曲线，不但可以得到病原体的定性检测结果，还可以对病原体的数量进行准确定量。

 

　　多组分图扩增曲线没有抬升，是很明显的阴性样本，但是扩增图谱的扩增曲线抬升了，这样就会与阈值线相交，反而有了CT值。这是由于软件在进行基线自动扣除的时候出现错误，引起了扩增曲线抬升。

 

　　出现这种情况可以采取手动调整基线的方法，重新定义基线即可正常，即将基线起点改为荧光信号稳定的循环数（一般是3），基线终点要改成扩增曲线起峰的前一个循环数（比如起峰是在第25个循环，那基线的终点就是24）。引起这样的原因是由于选用的耗材、试剂或者操作的原因导至背景荧光信号有所波动，从而造成反应孔的自动基线扣除错误。