皖仪离子色谱法测定多肽中的哌啶

关键词：离子色谱；多肽；合成；哌啶；方法学。

引言

哌啶是一种含有两个碳和一个氮的环状有机化合物。在多肽合成中，哌啶主要是作为一个结构单元或一个反应的底物存在。哌啶在多肽合成中起到了多种作用，从结构单元到保护基团，再到反应底物和优化反应条件。哌啶在最终合成的多肽中有所残留，而哌啶具有毒性，是一种升压剂，因此必须控制最终产物的哌啶残留量。皖仪开发了一种离子色谱测试方法检测多肽中哌啶的含量，样品前处理操作简单，测试准确性高，重复性良好，与其他组分间分离度良好，可以满足客户大规模测试的要求，并且提高时效性，测试结果一致性，减少人为及系统误差。

1、实验方法

1.1 测试条件仪器：

IC6600系列离子色谱仪配置电导检测器

图为IC6600系列多功能离子色谱仪

色谱柱：MS-5C-P1阳离子色谱柱（4.6mm×250mm）；
保护柱：阳离子保护柱（30 mm×4 mm）；

柱温：30℃；

流速：1.0ml/min；

进样量：25μL；

检测器：电导检测器。

1.2 使用试剂标样：哌啶标准样品（客户提供的纯哌啶）

1.3 标准溶液制备标准原液的制备：称量0.100g纯哌啶移至100mL容量瓶用纯水定容至刻度线。

标准样品工作液:分别吸取0.002mL、0.005mL、0.01mL、0.02mL、0.05mL、0.08mL和0.10mL母液(1000mg/L)于10mL容量瓶中,用超纯水定容至刻度,配得哌啶质量浓度为0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、8mg/L和10mg/L的混合标准工作液。临用现配。

表1标准系列曲线浓度梯度表

2、测试结果

2.1 哌啶线性测试结果

依次移取0.2mg/L、0.5mg/L、1mg/L、2mg/L、5mg/L、8mg/L和10mg/L的系列标准工作曲线工作液，按照1.1工作测试条件得到标准曲线多点重叠图如图1，哌啶在该色谱条件下线性相关系数R=0.999以上，线性良好。

图1 哌啶标准曲线重叠色谱图

表2线性方程

2.2 样品谱图

在1.1的工作测试条件下条件下，对样品进行检测。样品图谱如图2所示样品图谱中的目标哌啶离子峰形对称，分离度良好，最终得到样品中哌啶的含量。样品中哌啶含量为2.283mg/L，样品重复性良好样品RSD在0.301％，符合客户需求。

图2 样品测试谱图

3、总结

本次采用皖仪科技离子色谱仪IC6600系列对样品中的哌啶进行标准曲线验证、重复性验证。测试结果峰形较好，线性良好，重复性满足要求，灵敏度高完全满足测试要求。