色谱柱的分离度与色谱柱的长度、固定相的性质、液膜厚度、载气流速和性质、柱温均有关系。

1分离度R与柱长L的平方根成正比，因此，采用较长的色谱柱可以获得更高的分离度，但相应的分析时间也会延长。而且色谱柱越长压降越大，柱过长会增大进出口压力比，相反会降低分离度。

2固定相的性质与分析物越相似，分离度就越高。

3从上述公式可以看出，液膜厚度的增加会导致塔板高度的增加，柱理论塔板数降低，同时还会增加分析物在固定相中的分配系数，理应导致分离度的降低，但事实上，在分配系数增加的同时，△K增加更为显著，所以液膜厚度的增加能提高分离度。

4分子质量大的载气的优点是扩散作用小，缺点是在柱中压降大、流速慢，即分析周期长。分子量小的载气传质阻力小，有利于提高色谱分析速度，但是浓度较高的介质易在其间形成扩散，影响分离度，所以在实际测量中氢气、氦气一般都用于介质浓度较低的区域并提高其流速，减少扩散的影响。

5色谱柱存在一个*载气流速，但实际分析中为了缩短分析时间，流速通常稍大于*流速。

6提高柱温能提高分析物在流动相和固定相中的扩散系数，降低传质阻力，加快分析速度，同时使得色谱峰变窄、变高，但会导致分离度的下降。

7色谱分离是样品在流动相和固定相中反复分配的过程，过载后本来该进入固定相的样品在固定相在得不到保留，就被流动相推着往前走，因此造成了保留变化，因此进样量与分离度也是有关系的。