考马斯亮兰R-250

产品货号：0472-1

储存条件：室温

产品描述

考马斯亮蓝（Coomassie brilliant blue）是两种相似三苯甲烷染料的总称，有 G250 和 R250 两种，结构上前者比后者多 了 2 个甲基，命名上“G”为 Green 的缩写，因 G250 的蓝色染料泛浅绿色；命名上“R”为 Red 的缩写，因 R250 的蓝色染料呈 微红色调；“250”表示考马斯亮蓝的纯度。生化实验中常将考马斯亮蓝用于蛋白定量和蛋白电泳中蛋白染色。工作原理是： 通过与蛋白质内的氨基和羧基基团间的静电结合作用以及范德华力，考马斯亮蓝与蛋白质形成强但非共价键连接的复合物。 蛋白-染料复合物的形成稳定染料携带的负电荷阴离子（如磺酸基），从而产生在膜上或者胶上肉眼可见的蓝色。 考马斯亮蓝 R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于电泳蛋白的染色，染色灵敏度比氨基黑高 5 倍，可达 0.1 µg 蛋白。R250 染色后需要褪色，才能进行蛋白条带的观察。 考马斯亮蓝 G250 的检测灵敏度虽然较低，但也可替代 R250，使用一种快速而简单的方法进行蛋白染色。因其具有以 下特性，即在低于 pH 2.0 时，溶液无色；pH 7.0 时溶液呈深蓝黑色；若发生酸化，溶液呈现透明的棕褐色。当 G250 与蛋白 结合，溶液又回到蓝色，主要因为蛋白分子周围具有更偏中性的 pH 环境。合适条件下，当把胶放在酸化的 G250 溶液中染 色，显示出蓝色的蛋白条带，背景呈浅琥珀色。此种方法条带快速显色，且背景颜色也很浅使得条带看起来很清楚，则不需 要做褪色处理。大部分蛋白用 G250 检测的下限是 0.5 µg。虽然灵敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比 R250 染 色节省高达 11 h。

产品性质

使用方法

1.标准染色步骤（考马斯亮蓝 R250）

1）蛋白电泳凝胶置于 50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平摇床上低速摇动 30 min~过夜。

2）去除固定液，更换 0.25%考马斯亮蓝 R250 染色液（0.25% R250 溶于 50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液）*覆盖住胶， 染色 2-4 h。直至胶染成均匀的蓝色。注意：当胶在染色液内肉眼不可见时，说明染色完成，否则与深色的染色液对比，凝 胶区域看起来颜色偏浅。

3）将胶重新放置在 5%甲醇，7.5%醋酸，87.5%水溶液中脱色 4-24 h。约 1-2 h 后蛋白条带即可看到，直至背景变透明后脱 色才结束。中间可更换 2-4 次脱色液。 注意：此方法可检测到的蛋白量最di达到 0.1 µg 蛋白/条带。

4）将胶存放在 7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

2.快速染色步骤（考马斯亮蓝 R250）

1）蛋白电泳凝胶在 25% IPA，10%醋酸的水溶液中固定 30-60 min。

2）将胶放置在 10%醋酸的水溶液中进行染色，含有 60 µg/mL 的考马斯亮蓝 R250。约 30 min 后条带显示，让胶继续染色直 至达到理想的蛋白条带。在此染色方法中胶的背景染色比较浅，由于使用胶的浓度很低。

3）将胶重新放在 10%醋酸溶液中脱色 2 h 或更长。期间可更换 2-4 次脱色液。 4）将胶存放在 7%醋酸中。也可以放在水中或者干燥保存。

注意事项

1）0.25%考马斯亮蓝 R250 染色液配置的过程中，需要先用甲醇溶解 R250 粉末后，再加入醋酸和水，一般情况下不需要滤 纸除杂。溶液可在 4℃存放 6 个月，若长时间保存出现沉淀，可用滤纸过滤得到澄清液体。

2）为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

3）本产品仅作科研用途！