微生物角鲨烯合成酶(SQS)elisa检测试剂盒
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ELISA法是免疫诊断中的一项新技术,现已成功地应用于多种病原微生物所引起的传染病、寄生虫病及非传染病等方面的免疫诊断。也已应用于大分子抗原和小分子抗原的定量测定,根据已经使用的结果,认为ELISA法具有灵敏、特异、简单、快速、稳定及易于自动化操作等特点。不仅适用于临床标本的检查,而且由于一天之内可以检查几百甚至上千份标本,因此,也适合于血清流行病学调查。本法不仅可以用来测定抗ti,而且也可用于测定体液中的循环抗原,所以也是一种早期诊断的良好方法。因此ELISA法在生物医学各领域的应用范围日益扩大,
组成结构
1、血清:操作过程中避免任何细胞刺激。使用不含热原和内du素的试管。收集血液后,1000×g离心10分钟将血红细胞迅速小心地分离。
2、2、血浆:EDTA、柠檬suan盐、肝素血浆可用于检测。1000×g离心30分钟去除颗粒。
3、细胞上清液:1000×g离心10分钟去除颗粒和聚合物。
4、组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。1000×g离心10分钟,取上清液。
5、保存:如果样品不立即使用,应将其分成小部分-70℃保存,避免反复冷冻。尽可能的不要使用溶血。如果血清中大量颗粒,检测前先离心或过滤。不要在37℃或更高的温度加热解冻。应在室温下解冻并确保样品均匀地充分解冻。
微生物角鲨烯合成酶(SQS)elisa检测试剂盒
操作步骤:
1、使用前,将所有试剂充分混匀。不要使液体产生大量的泡沫,以免加样时加入大量的气泡,产生加样上的误差。
2、根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数。每个标准品和空白孔建议做复孔。每个样品根据自己的数量来定,能使用复孔的尽量做复孔。
3、加入稀释好后的标准品50ul于反应孔、加入待测样品50ul于反应孔内。立即加入50ul标记的抗体。盖上膜板,轻轻振荡混匀,37℃温育45分钟。
4、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
5、每孔加入100ul的亲和链酶素-HRP,轻轻振荡混匀,37℃温育30分钟。
6、甩去孔内液体,每孔加满洗涤液,振荡30秒,甩去洗涤液,用吸水纸拍干。重复此操作4次。如果用洗板机洗涤,洗涤次数增加一次。
7、每孔加入底物A、B各50ul,轻轻振荡混匀,37℃温育5分钟。避免光照。
8、取出酶标板,迅速加入50ul终止液,加入终止液后应立即测定结果。
9、在450nm波长处测定各孔的OD值。
操作注意事项:
1、试剂应按标签说明书储存,使用前恢复到室温。稀稀过后的标准品应丢弃,不可保存
2、实验中不用的板条应立即放回包装袋中,密封保存,以免变质。
3、不用的其它试剂应包装好或盖好。不同批号的试剂不要混用。保质前使用。
4、使用一次性的吸头以免交叉污染,吸取终止液和底物A、B液时,避免使用带金属部分的加样器。
5、使用干净的塑料容器配置洗涤液。使用前充分混匀试剂盒里的各种成份及样品。
6、底物A应挥发,避免长时间打开盖子。底物B对光敏感,避免长时间暴露于光下。避免用手接触,有毒。实验完成后应立即读取OD值。
7、加入试剂的顺序应一致,以保证所有反应板孔温育的时间一样。按照说明书中标明的时间、加液的量及顺序进行温育操作。
一般来讲,96T能检测90个样本,48T能检测42个样本,这里面需要用标样来做标准曲线,所以各位需要做实验的老师们,请在购买ELISA试剂盒的时候注意,需要做多少个样本,在决定买多大规格的试剂盒,以免做实验时出现试剂盒不够用或者浪费!
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