Olink 超微量高灵敏靶向蛋白组分析仪

一、仪器主要用途：

（1）Signature Q100可以直接对不同基质（包括血浆、血清、脑脊液、泪液、肺泡灌洗液、尿液、外泌体裂解液和细胞提取物等）中多种低丰度蛋白分子进行超高灵敏度检测。仅需要1ul上样量即可同时检测92种蛋白因子，一个样品中可检测多达上千种蛋白，灵敏度可以达到fg/ml的水平，动态范围可以达到10个log值。这些功能蛋白涉及炎症、免疫应答、心血管、肿瘤、神经、代谢、器官损伤、发育和细胞调节等相关功能蛋白。

（2）Olink技术认可度高，人类血浆蛋白组推荐，美国癌症登月计划临床检测技术推荐，UKB和deCODE大量用于人群队列研究，近几年发表文献超过1000篇，其中包括高分杂志LANCET、NEJM、Cell、Nature、Science等，涉及心血管、神经、肿瘤、感染性疾病、免疫炎症、内分泌、生殖、眼科、精神类等各种疾病研究领域的应用。该仪器型号Signature Q100，产地瑞典，品牌Olink Proteomics，代理商是斑马鱼（北京）科技有限公司。

二、检测原理：

（1）Signature Q100超微量高灵敏靶向蛋白组分析仪采用PEA（Proximity Extension Assay，邻位延伸技术）的技术，这是一种靶向蛋白检测方法，它结合了基于双抗体夹心的免疫分析和“DNA 条形码”技术，它的原理非常巧妙（如下图所示）：

（2）首先针对目标蛋白设计一对抗体，让每种抗体上连接互补的DNA寡核苷酸探针；这对抗体特异性地与目标蛋白结合后，抗体对上的DNA寡核苷酸链杂交，创建一个双链DNA"条形码"，该条形码对于靶蛋白来说是的，并且在数量上与靶蛋白的初始浓度成正比。杂交和延伸后立即进行PCR扩增信号放大，最后再通过SignatureQ100微流控技术进行检测。通过这一过程，蛋白浓度信号会转换成核酸信号，从而实现不同丰度蛋白的检测。

三、实验流程(以血浆检测为例）：

1、免疫孵育：将1ul血浆加入反应溶液中，再加入92对偶联寡核苷酸链的抗体，在4 ℃进行免疫孵育反应；

2、延伸及预扩增：结合在同一蛋白上邻近的一对抗体的寡核苷酸单链会形成互补配对，并在DNA聚合酶等的作用下延伸成一条完整“DNA”条形码，并进行PCR扩增；

3、信号检测：将扩增后的样品加入到Signature Q100设备的微流控芯片中，机器自动进行Loading、定量检测以及信号读取。

四、Signature Q100性能优势：

1、超高灵敏度：目标蛋白检测灵敏度（低至fg/ml水平），可以在组学水平上检测疾病相关的成百上千种低丰度蛋白（尤其是血浆、血清、房水、脑脊液、胸水、尿液等各种体液样本中的低丰度蛋白）；

2、样本微量：仅需要1ul上样量可同时检测多达92种非常低浓度的蛋白因子，可检测微量样品，节约珍贵样本；

3、多重能力：一个样品中可检测多达上千种功能蛋白，达到组学研究水平；

4、宽动态范围：检测范围横跨10个log值，可以同时兼顾不同丰度的蛋白；

5、高重复性：引入成熟“DNA”条形码技术及定量作为检测手段，重复性非常好，数据质量高重现性好，适合疾病研究、多组学联合应用以及大队列大数据分析要求。质控设计和充分验证，所有数据具备组学水平最高

6、高特异性：基于PEA技术的特性，解决了多重免疫检测中*存在的抗体交叉反应及信号串扰问题（如下图A所示），而PEA是对目标蛋白的双抗体识别和高保真DNA杂交检测的双重要求，所以不会检测出任何非特异性抗体结合的信号（如下图B所示）：

五、Olink 与质谱检测技术比较：

1、Olink检测的灵敏度更高，能检测到fg级别的蛋白：

质谱目前检测的多为血浆血清里的偏高丰度的蛋白，实际上那些中低丰度的蛋白也有非常重要的作用，这部分蛋白olink可以非常好的检测到，如下图所示：

Stefanie M. Hauck团队的在“Systems biology in cardiovascular disease: a multiomics approach”文中写道：高丰度蛋白质的存在，如血清白蛋白或免疫球蛋白，在高度复杂的血浆基质中直接影响质谱检测的灵敏度，使得低丰度蛋白质如细胞因子没办法好的被检测出来。而邻位延伸技术(Olink)相对于质谱分析增加了蛋白质组覆盖的深度。

2、Olink PEA在“靶向检出蛋白数”、“重现性”方面综合显著优于DDA、DIA：

质谱在多样本检测时形成的蛋白与样本的表达矩阵中存在比较多的缺失值。引用参考文献中数据：基于KORA队列中的173份血浆样本进行MS（DIA、DDA）与Olink PEA检测（8个Panel）数据比较，结果如下：

六、Olink技术 vs 其它蛋白检测技术：

科学家在瑞典斯德哥尔摩乌普萨拉地区的不同实验室对多个技术平台进行了头对头比较，Olink平台的检测指标通量、灵敏度、样品量、动态范围、重复性等方面都具有优势，如果感兴趣，可以和斑马鱼公司联系。

技术培训和支持：斑马鱼（北京）科技有限公司是Olink代理商，负责仪器和试剂的推广销售，具备丰富的细胞因子和蛋白标志物检测方面经验，可为用户提供样本制备、仪器操作、数据分析等一整套解决方案。在购买仪器后，将安排有资质的工程师进行现场安装和培训。在培训完成后，客户还将获得支持，包括远程技术支持（Technical Support）、现场应用科学家（FAS）、现场服务工程师（FSE）和生物信息学应用（Applied Bioinformatics）团队，覆盖实验工作流程、试剂耗材、仪器和软件的各个方面。

七、Olink在转化医学和临床研究中的应用：

1、生物样本库进行人群规模队列血液蛋白组检测
应用案例：英国生物样本库和冰岛deCODE中心均采用olink蛋白组平台进行大规模人群队列的血液蛋白组检测；
2、疾病早筛及伴随诊断蛋白标志物的开发（IVD及LDT开发）
应用案例：Octave公司的多发性硬化症伴随诊断试剂盒开发、香港叶玉如院士阿尔兹海默症早诊标志物开发、加拿大卵巢癌诊断标志物的开发；
3、药物靶点发现验证
应用案例：Scallop联盟采用基因组数据加olink蛋白组数据进行孟德尔随计划分析，做pQTL寻找因果关系；
4、临床预后疗效预测，病人分层&伴随诊断标志物开发
应用案例：美国癌症登月计划将Olink公司的Immuno-Oncology panel为肿瘤免疫.治疗中第一梯队的检测方法，主要用于免疫疗法的安全性及有效性评估；
5、免疫类组学研究
应用案例：近期新.冠炎症反应相关文章，自身免疫病，多组学联用研究免疫系统，早产儿、新生儿免疫系统发育评估等等；
6、分泌组学研究（主要用于细胞培养上清中蛋白因子检测）：
应用案例：无创胚胎评估技术、细胞系药物实验等
7、新技术应用开发
应用案例：CTC细胞及稀有细胞的转录&蛋白质组研究，外泌体的蛋白质组研究，生物标志物发现等。

八、技术参数：

1、功能用途：可以对细胞因子及蛋白标志物进行超微量、低丰度、超高灵敏度的多重检测；广泛应用于基础科学、转化医学、药物开发、临床试验、生物样本库和人群大队列研究；也可进行实验方案开发和优化，有利于生理状态评估、药物安全性有效性评估、诊断及疗效预测标志物开发，适合科研创新和开创性研究；
2、样品类型：血浆、血清、脑脊液、泪液、肺泡灌洗液、尿液、外泌体裂解液和细胞提取物等；
3、仪器为一体化设计，触屏操作，采用微流控技术自动构建纳升级反应体系；
4、最小上样量：≤1ul血浆或其它体液样本；
5、多重检测：1ul样本可同时检测≥92种细胞因子；
6、灵敏度：fg/ml，发现不易检测的蛋白标志物；
7、动态范围：10 log（fg/ml-ug/ml），可同时在一个体系里检测低表达和高表达的蛋白靶标；
8、可检测指标数：每个样本可检测蛋白指标数≥1000个；
9、高重复性：CV值小于10%；
10、高特异性：基于PEA技术，克服了多重免疫检测中抗体交叉反应及信号串扰问题；
11、温控范围：4–99 ºC；
12、抗体孵育：待检测蛋白的抗体与样本在同一个孔中完成均相孵育，无需洗板和包被；
13、绝对定量：可以进行绝对定量；
14、发表文献≥1000篇。

九、斑马鱼（北京）科技有限公司，是Olink的经销商，负责超微量高灵敏靶向蛋白组分析仪的推广销售和技术支持，为您提供仪器的参数、价格、选型、技术原理等信息，更多相关信息可留言或咨询。