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激光共聚焦显微镜使用激光光源在样品表面会聚成点进行逐点扫描荧光激发,同时利用与会聚点共轭的探测器前端针孔来抑制非焦平面处的荧光,从而实现三维层析扫描成像,相比普通荧光显微镜具有更高的横、轴向分辨率,对比度和成像深度。
适用范围:
影像中心内两台Leica SP8共聚焦显微镜均为正置式荧光显微镜,适合观察脑组织切片、细胞涂片之类的样品,不适合用来观察在培养皿中培养的活细胞。该系统配有多模块的载物台和20倍长工作距离水镜,也可以用来在体观察麻醉动物的组织。另外,该系统还配有25倍透明化介质专用物镜,可以用于观察透明化样本。
关键技术指标:
激光器:405nm(50mW)、488nm(20mW)、552nm(20mW)、638nm(30mW),快速AOTF,切换时间<5毫秒。
成像模式:普通透射光明场和荧光成像。其中荧光成像采用棱镜分光,所有检测通道均可以自由选择400~800 nm的检测波长,分光精度1nm,检测波长范围及中心连续任意可调。
滤块参数:DAPI Ex: BP 360/40 Em: BP 470/40
GFP Ex: BP 470/40 Em:BP 525/50
YFP Ex:BP 500/20 Em: BP 535/30
RHOD Ex:BP 546/10 Em: BP 585/40
检测器:2个光谱扫描PMT(光电倍增管探测器)、2个光谱扫描HyD(超高灵敏度的磷砷化镓--雪崩型二极管混合型GaAsP检测器,在500nm处量子探测效率达到45%);
物镜:
5x (BABB, NA=0.15, DLS, WD=4.8mm) HC PL FLUOTAR;
10x (Air, NA=0.40, WD=2.74mm) HC PL APO CS2;
20x (Air, NA=0.75, WD=0.62mm) HC PL APO CS2;
L20x (Immersion, NA=0.95,WD=1.95mm) HCX APO IMM;
25x (Immersion, NA=1.0,WD=6mm,带电动矫正环)用于CLARITY样品 HC FLUOTAR IMM;
40x (Oil, NA=1.3, WD=0.24mm) HC PL APO CS2;
分辨率:横向分辨率≥140nm;纵向分辨率350nm
扫描分辨率:4×1至8192×8192。各通道均可达到8192×8192的分辨率,及16位灰阶深度。
扫描模式:高分辨(Galvano-mirror)和高速扫描模式(Resonant-scanner)可选,高分辨模式时扫描速度7fps@512×512,扫描视野22mm。高速扫描模式下扫描速度28fps@512×512。
扫描变倍:变倍范围0.75x ~48x,连续变倍。
图像处理软件:LAS X, 含3D可视化、细胞内结构测量、串色分离、全标本导航及拼图。