使用蛋白 A/G 磁珠进行抗体纯化的步骤与技巧
时间：2024-11-04 阅读：84
一、准备工作
材料准备
蛋白 A/G 磁珠
待纯化的抗体样品
缓冲液
磁力架
离心管
磁珠预处理
根据磁珠的使用说明，进行必要的预处理。
二、纯化步骤
抗体样品准备
将待纯化的抗体样品置于合适的离心管中。
磁珠结合
将适量的蛋白 A/G 磁珠加入抗体样品中，轻轻混匀。
在室温下缓慢旋转或振荡一定时间，使抗体与磁珠充分结合。
磁分离
将离心管放置在磁力架上，静置一段时间，使磁珠聚集在磁场边缘。
去除上清液，保留磁珠与抗体的复合物。
洗涤
加入适量的洗涤缓冲液，轻轻混匀后再次进行磁分离。
重复洗涤步骤数次，以去除未结合的杂质。
抗体洗脱
加入适当的洗脱缓冲液（通常为低pH缓冲液），轻轻混匀。
室温下静置一段时间后，再次进行磁分离。
收集上清液，即为纯化的抗体。
三、技巧与注意事项
控制结合时间
结合时间过短可能导致抗体结合不全，过长则可能影响抗体活性。需根据实际情况调整。
选择合适的缓冲液
不同的抗体可能对缓冲液的要求不同，需根据抗体的性质选择合适的缓冲液。
洗涤
洗涤步骤要完整，以确保去除杂质，但也要避免过度洗涤导致抗体损失。
注意pH值
洗脱缓冲液的pH值要适当，过低可能导致抗体变性，过高则可能导致洗脱效果不佳。
避免污染
在整个操作过程中，要注意无菌操作，避免交叉污染。