DL-Nuclear Fix/Perm Kit主要应用于对转录因子、核蛋白、细胞因子和趋化因子进行核内染色，可固定细胞并透化细胞核核膜，进而对核内蛋白质进行染色。Nuclear-Perm/Wash Buffer经过反复优化，可减少非特异性染色并大化特异性荧光信号强度。

二、产品特点：

1.针对转录因子、核蛋白、细胞因子和趋化因子进行核内染色

2.特异性强，荧光信号强度高

三、产品成分：

四、试剂配制：

1.Fix/Perm工作液（1X）：将1体积Fix/Perm Concentrate (2X)加入1体积的Fix/Perm Diluent，如将1ml Fix/Perm Concentrate (2X) 加入1ml的Fix/Perm Diluent，配制成2ml的Fix/Perm工作液，使用前新鲜配制。

2. N-Perm/Wash Buffer工作液（1X）：将1体积N-Perm/Wash Buffer (10X)加入9体积的去离子水，如将1ml N-Perm/Wash Buffer (10X) 加入9ml的去离子水，配制成10ml的1X N-Perm/Wash Buffer，1X N-Perm/Wash Buffer可保存在4℃并于一周内使用。

五、使用说明：

（请详细阅读使用说明后再开始相关实验）

1.表面染色（可选）：收集细胞后，每管加入50ul表面染色缓冲液和适量体积的表面抗体，充分重悬细胞，4℃，避光孵育30 min后，加入500 ul表面染色缓冲液，300g×5min，4℃离心，弃去上清液；

2.使用涡旋振荡仪震荡细胞沉淀，使其松散。

3.向每管细胞中加入500ul Fix/Perm工作液，充分重悬细胞，2-8°C避光孵育30分钟；

4.向每管细胞中添加1ml N-Perm/Wash Buffer工作液；

5.600g×5 min离心，4℃，弃去上清液；

6.每管加入100ul 1X N-Perm/Wash Buffer工作液和适量体积的胞内抗体，充分重悬细胞；

7.2-8°C避光孵育1h以上或过夜；

8.向每管细胞中添加1ml N-Perm/Wash Buffer工作液，洗去未结合抗体，600g×5 min离心，4℃，弃去上清液；

9.重复洗涤一次。

10.将细胞重悬于300-500ul N-Perm/Wash Buffer工作液进行上机分析。