产品类型和操作步骤:

ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有3种必要的试剂:

1.固相的抗原或抗体,

2.酶标记的抗原或抗体,

3.酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。

(一)双抗体夹心法、

(二)一步法、

(三)间接法测抗体、

(四)竞争法。

试剂配制:

1、酶联板(Assay plate ):一块(96孔或者48孔)。

2、标准品(Standard):2瓶(冻干品)。

3、样品稀释液(Sample Diluent):1×20ml/瓶。

4、生物素标记抗体稀释液(Biotin-antibody Diluent):1×10ml/瓶。

5、辣根过氧化物酶标记亲和素稀释液 (HRP-avidin Diluent):1×10ml/瓶。

6、生物素标记抗体(Biotin-antibody):1×120μl/瓶(1:100)

7、辣根过氧化物酶标记亲和素(HRP-avidin):1×120μl/瓶(1:100)

8、底物溶液(TMB Substrate):1×10ml/瓶。

9、浓洗涤液(Wash Buffer):1×20ml/瓶,使用时每瓶用蒸馏水稀释25倍。

10、终止液(Stop Solution):1×10ml/瓶(2N H2SO4)。

产品选型：

1是检测抗体还是抗原。

2:检测的结果是定性还是定量。

3是否需要检测特异抗体的类型。

4:所用抗体/单克隆抗体的亲和力/亲和力怎么样

操作步骤：

1.标准品的加样 :设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;o 

2.加样: 分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μ l,然后再加待测样品10μ1(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。

3.加酶: 每孔加入酶标试剂100μ1,空白孔除外。

4.温育: 用封板膜封板后置37C温育60分钟。

5. 配液:将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用。

6.洗涤: 小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去，如此重复5次,拍干。

7. 显色:每孔先加入显色剂A50μ1,再加入显色剂B50μ1,轻轻震荡混匀，37C避光显色15分钟。

8. 终止:每孔加终止液50μ1,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

9.测定:以空白孔调零, 450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

标准曲线计算:

以标准物的浓度为横坐标，0D 值为纵坐标,在坐标纸上绘出标准曲线,根据样品的0D值由标准曲线查出相应的浓度;再乘以稀释倍数;或用标准物的浓度与0D值计算出标准曲线的直线回归方程式，将样品的0D值代入方程式，计算出样品浓度,再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。