CFPS攻无不克 膜蛋白难题迎刃而解
时间:2024-09-10 阅读:120
膜蛋白在细胞的物质运输、信号转导、增殖分化等许多生命活动中起着非常重要的作用,是重要的药物靶点。然而,由于表达量低、构象不稳定、难分离纯化等原因,许多研究受限于膜蛋白难表达而止步不前。
山东农业大学某课题组就遇到这样一个难题:某膜蛋白用原核体系难以表达,经过两年时间反复尝试,仍未攻克难关。
珀罗汀生物基于自主研发的无细胞蛋白表达(CFPS)系统,已成功表达多例全长跨膜蛋白。该课题组慕名而来,在进一步了解CFPS技术以及珀罗汀生物在无细胞领域的技术优势之后,决定委托珀罗汀生物,利用CFPS平台尝试表达该膜蛋白。
测试方法
收到客户质粒后,珀罗汀生物研发人员立即着手构建线性表达模板,为了直接观测目标膜蛋白的表达情况并提高其可溶性,研发人员还构建了融合GFP的表达模板。随后,采用专研的针对膜蛋白的CFPS体系(即PLDK002试剂盒来源体系),并添加去垢剂【1】,于收到质粒当天完成无细胞反应体系构建。
实验设计:
组别 | NC | A1 | A2 | B1 | B2 |
是否融合GFP | - | - | - | + | + |
是否添加去垢剂 | - | - | + | - | + |
纯化标签 | - | His标签 |
注:【1】该去垢剂是依据珀罗汀生物膜蛋白表达案例库的实验数据选出。
测试结果
图1融合GFP的目标膜蛋白在照胶仪下发出绿色荧光
次日,取反应后上清,进行亲和纯化、表达鉴定。如图1所示,B1、B2两组在照胶仪下均发出绿色荧光,提示融合GFP的目标膜蛋白无论是否添加去垢剂,均可在CFPS体系的上清液中可溶表达!
图2 目标膜蛋白SDS-PAGE结果图
经考染、脱色后,如图2所示,未融合GFP的目标膜蛋白(A1、A2组)同样在上清液中可溶表达!此外,分别对比A1、A2组与B1、B2组可以发现,添加去垢剂可促进该膜蛋白的可溶表达。
总结
珀罗汀CFPS系统不负众望,两天之内,成功表达了困扰该课题组长达两年的膜蛋白,“难表达蛋白的救星”名副其实!本次实验的成功,再次显示出珀罗汀CFPS技术在膜蛋白等难度蛋白表达领域中的绝伦。