CP-1细胞冻存液(临床级冻存液)
・获得日本再生医学等产品材料的资格认证
1.产品从1992年开始推广应用
2.在日本国内的GMP设备中生产制造
3.进行了非临床实验
5.可以在-80℃的冰箱中冷冻保存
6.不含动物来源的成份
7.成分公开透明
8.拥有日本原料药注册证(MF)
应用实例
I 悬浮细胞和贴壁细胞的冷冻方法
II 使用CP-1HG冷冻保存/解冻造血干细胞的方法
III。 使用CP-1HG间充质干细胞冷冻保存/解冻方法
冷冻保存液的制备
·1.CP-1高等级,25%HSA,将介质冷却至4℃。
·2.将CP-1高级6.8 mL,25%HSA 3.2 mL和10.0 mL培养基加入离心管中,并均匀混合。
·3.即将使用之前,请保存在4℃下。
细胞冷冻保存
·1.用剥离溶液收集要冷冻保存的细胞,并计数细胞数。
·2.离心除去上清液。
·3.预先添加已冷却至4°C的CP-1高品位/ 25%HSA /培养基(冷冻保存液-2的制备),均匀悬浮至1×106细胞/ mL。
·4.将各1 mL放入冷冻管中,放入冷冻容器中,并在-80°C缓慢冷冻。
·5.第二天移至液氮或-150℃的深冷柜中。
解冻细胞
·1.事先在离心管中准备9 mL培养基。
·2.从液氮中取出冷冻的冷冻管,并在37°C的温水浴中快速融化。
·3.将所有解冻的细胞添加到培养基中并离心。
·4.除去上清液,并添加适量的培养基。
·5.在每种使用的细胞类型的最佳条件下进行培养。
IV 评价结果(间充质干细胞冷冻保存)
V 使用CP-1HG冷冻保存iPS / ES细胞并进行评估
Ⅰ. 悬浮细胞和贴壁细胞的冷冻方法
Ⅱ.CP-1®High Grade冷冻保存/解冻造血干细胞的方法Ⅲ.CP-1®High Grade应用于间充质干细胞冷冻保存/解冻方法
冷冻保存液的制备
·1.CP-1高等级,25%HSA,将介质冷却至4℃。
·2.将CP-1高级6.8 mL,25%HSA 3.2 mL和10.0 mL培养基加入离心管中,并均匀混合。
·3.即将使用之前,请保存在4℃下。
细胞冷冻保存
·1.用剥离溶液收集要冷冻保存的细胞,并计数细胞数。
·2.离心除去上清液。
·3.预先添加已冷却至4°C的CP-1高品位/ 25%HSA /培养基(冷冻保存液-2的制备),
均匀悬浮至1×106细胞/ mL。
·4.将各1 mL放入冷冻管中,放入冷冻容器中,并在-80°C缓慢冷冻。
·5.第二天移至液氮或-150℃的深冷柜中。
解冻细胞
·1.事先在离心管中准备9 mL培养基。
·2.从液氮中取出冷冻的冷冻管,并在37°C的温水浴中快速融化。
·3.将所有解冻的细胞添加到培养基中并离心。
·4.除去上清液,并添加适量的培养基。
·5.在每种使用的细胞类型的最佳条件下进行培养。
Ⅳ.评价结果(间充质干细胞冷冻保存)
[目的]关于有望在将来用于再生医学的人间充质干细胞(hMSCs)可以冷冻保存在CP-1高等级中,并可以通过廉价,方便的干冰稳定地长期运输吗?
[方法]将人脂肪来源的间充质干细胞(MSC-AT)或人骨髓来源的间充质干细胞(MSC-BM)冷冻在CP-1High Grade或对照中(下图中的A)(1 x 106细胞) / mL),并储存在液氮罐中。 储存在液氮罐中后,应在假定干冰运输(-80°C·7天,-60°C·3天,60°C·7天),融化后立即存活率和第二天培养的每种条件下储存 确认对血管的粘附率(粘附率=活细胞数/接种的活细胞数)。
[结果]在所有条件下,融化后的存活率均为90%以上,未观察到差异(下图B)。 然而,在冷冻的hMSC作为对照中,解冻后的第二天在-60°C储存时观察到许多未粘附在培养箱中的死细胞,但是在CP-1中冷冻的hMSC中几乎没有观察到死细胞,并且几乎没有观察到所有死细胞。 连接细胞(下图中的B和C)。
[结论]由于干冰本身的温度约为-80°C,因此我们认为在CP-1High Grade中冷冻的hMSC可以使用干冰稳定且长期运输。