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¥6210产品特点
安全无毒:GS-GelRed的油性和大分子量特点使其不能穿透细胞膜进入细胞内;
灵敏度高:适用于各种分子量DNA电泳,对于微量的DNA具有更高的检测灵敏度;
信噪比高:样品荧光信号强,背景信号低;
适用范围广:胶染法(电泳前染色)和泡染法(电泳后染色)均可;适用于琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶电泳;可用于dsDNA、ssDNA和RNA染色。
产品简介
GS-GelRed 核酸凝胶染料(10,000×)是一种安全、灵敏、稳定的荧光核酸凝胶染色试剂,适用于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上的dsDNA、ssDNA和RNA染色,经过本产品染色的DNA条带在紫外光投射下呈现红色荧光,可以替代溴化乙锭(EtBr)。艾姆斯氏试验结果也表明,该染料的诱变性远远小于溴化乙锭(EtBr),使用更加安全。
GS-GelRed和EB具有相同的光谱特性,不需要更换成像系统,使用与观察EB相同的普通紫外凝胶透射仪观察即可,在300 nm紫外光附近可得到最佳激发。注意GS-GelRed不能被488 nm氩离子激光器(如蓝光透射仪)或相似波长的可见光wan全激发,因此不推荐使用此类激发装置的成像系统。
适用范围
适用于琼脂糖或聚丙烯酰胺凝胶上的 dsDNA、ssDNA 和 RNA 染色。
注意事项
1. 染料无需低温冷藏,请于室温下避光储存,避免沉淀。若出现沉淀,请将染料置于 45~50℃ 2 min,振荡使充分溶解后再使用;
2. 由于 GS-GelRed 的高灵敏性,建议减少 DNA 样品上样量,推荐已知浓度样品的上样量为50~200 ng/泳道;
3. 聚丙烯酰胺凝胶电泳请使用泡染法。
使用方法
一、胶染法(电泳前染色,用法同 EB)
1. 配制合适浓度的琼脂糖凝胶;
2. 用微波炉加热使琼脂糖wan全融化;
3. 加入 GS-GelRed 使其终浓度为 1× (即 100 mL 凝胶中加入 10 μL GS-GelRed 10,000×水溶液),此时溶液呈淡粉色;
4. 将含有 1×GS-GelRed 染液的琼脂糖溶液倒入胶槽中,插入齿梳,室温凝固;
5. 按照常规方法进行电泳;
6. 用 302 nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
二.泡染法 (电泳后染色)
1. 按照常规方法进行电泳;
2. 使用 0.1 M NaCl 溶液稀释 GS-GelRed 染液至 3×染色液(例如将 15 μL GS-GelRed 10,000×水溶液加入 50 mL 0.1 M NaCl 溶液中);
3. 将凝胶小心地放入合适的容器中,缓慢加入足量的 3×染色液浸没凝胶,室温摇床孵育 30 min(对于含 3.5~10%丙烯酰胺的聚丙烯酰胺凝胶,需孵育 30 min~1 h,时间随着丙烯酰胺含量增加而延长。单次使用的 3×染色液可重复使用 3 次左右,室温避光保存);
4. 用 302 nm 激发的 UV 凝胶成像系统观察结果。
GS-GelRed 核酸凝胶染料(10,000×)常见问题与解决办法
Q1:使用胶染法,出现 DNA 条带弥散、拖尾或弯曲等现象?
A1:
1) 确保使用的染料终浓度为 1×;
2) DNA 上样量过多。将 DNA 样品上样量减少至 1/3 或 1/5;
3) 凝胶浓度不合适。检测大片段 DNA 建议使用低浓度琼脂糖凝胶;
4) 样品中 loading buffer 过量。loading buffer 中的 SDS 可能会影响电泳效果,建议减少 loadingbuffer 用量;
5) 使用合适的电压,建议 5~10 V/cm;
6) 使用新鲜的电泳缓冲液。
Q2:使用胶染法发现 DNA 迁移率存在差异?
A2:
1) 将 DNA 样品上样量减少至 1/3 或 1/5;
2) GS-GelRed 分子量较大,大分子量导致 DNA 的迁移速率可能受到染料与 DNA 比率的影响。因此不建议将 GS-GelRed 直接添加到 loading buffer 中使用,这会导致条带迁移不准确;
3) 可使用泡染法准确确定 DNA 条带大小。
Q3:ssDNA 和 RNA 染色效果不如 dsDNA?
A3:GS-GelRed 对于 dsDNA 的灵敏度是 ssDNA 或 RNA 的 5 倍,可适当提高 ssDNA 或 RNA 上样量。