犬诱导型一氧化氮合酶(NOS2/iNOS)ELISA试剂盒应用定性夹心免疫检测技术,用合成的 HEV 多肽抗原包被微孔板板条,这些多肽是中国型 HEV 毒株核心氨基酸序列中抗原性很强的肽段,分别来自于该毒株的开放阅读框 2 和开放阅读框 3 。将样品或标准品加入孔中并孵育,如果其中存在 HEV IgM 抗体,这些抗体就会与 HEV 的多肽抗原结合,并固定在上面,洗板除去其它非特异性抗体和样品中的其它成份。然后加入羊抗人 IgM-HRP (辣根过氧化物酶)酶结合物,经第二次孵育后,酶结合物就会与第一次孵育结合上的 HEV IgM 抗体相结合,洗板除去未结合的酶结合物,加入 TMB 底物溶液,在第三次孵育时会发生酶 - 底物反应,只有那些含有 HEV IgM 抗体和酶结合物所形成的复合物的孔才会发生颜色变化,加入硫酸溶液终止酶和底物间的反应,并在波长 : 450nm 处测量 O.D. 值 , 按照本 HEV IgM 抗体 elisa 试剂盒的测试标准 , O.D. 值大于或等于 Cut-Off 值的样品被认为是初试阳性。

组成:

犬诱导型一氧化氮合酶(NOS2/iNOS)ELISA试剂盒成分:

1 预包被板 : 抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 亲合纯化 96T

2 酶标记抗体 : (30 倍浓缩 )HRP 标记抗小鼠白介素 -6 兔子 IgG, 亲合纯化 0.4mL x 1

3 标准品 : 重组小鼠白介素 -6 0.5mL x 2

4 EIA 缓冲液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐温 20 BPS 30mL x 1

5 标记抗体稀释液 : 含 1% BSA, 0.05% 吐温 20 BPS 12mL x 1

6 显色剂 : TMB 底物液 15mL x 1

7 终止液 : 1N 硫酸 12mL x 1

样本处理
在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成份是否足够稳定。对收集后当天就进行检测的样本,及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及时分装后冻存在-20℃备用,有条件的也可以-70℃冻存备用。标本应避免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
1.血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
2.血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3.尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑眷液参照此实行。
4.细胞培养上清,
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。5.培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/m!左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。6.组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氨迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂,用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

试验原理:已知浓度的标准品、未知浓度的样品加入微孔酶标板内进行检测。先将标记的抗体同时温育。洗涤后,加入亲和素标记过的HRP。再经过温育和洗涤,去除未结合的酶结合物,然后加入底物A、B,和酶结合物同时作用。产生颜色。颜色的深浅和样品中的浓度呈比例关系。
elisa试剂盒安全性:
1．避免直接接触终止液和底物A、B。一旦接触到这些液体,请尽快用水冲洗。
2．实验中不要吃喝、抽烟或使用化妆品。

3．不要用嘴吸取试剂盒里的任何成份。