叶绿体是光合作用的细胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的叶绿体展开下游研究工作，叶绿体中所含的色素主要有两大类

，叶绿素(包括叶绿素a和叶绿素b)和类胡萝卜素(包括胡萝卜素和叶黄素)，它们与类囊体膜上的蛋白质结合，成为色素蛋白复合

体，其中叶绿素又称叶绿体色素(Chlorophyll)；类胡萝卜素是一种脂溶性且具有营养特性的化合物，给植物和动物提供天然色素

，是重要的抗氧化剂，并有能力转换为必需维生素，类胡萝卜素可预防细胞，组织和基因损毁，增强身体免疫系统，抵御感染，

减少癌症风险，保护心脏。

类胡萝卜素(Carotenoid)检测试剂盒(微板法)检测原理是类胡萝卜素不溶解于水，而溶于有机溶剂，以有机溶剂粗提类

胡萝卜素，根据朗伯-比尔定律，某有色溶液的吸光度(A)与其中溶质浓度(C)和液层厚度(L)成正比，即A=αCL，其中α为比例常

数，当溶液浓度以百分比浓度为单位，层液厚度为1cm时，α为该物质的吸光系数。在本试剂盒情况下叶绿素a、叶绿素b、

类胡萝卜素分别在665nm、649nm、470nm处有最大吸收波，根据经验公式可计算出叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜

素含量，主要用于植物组织中叶绿素、类胡萝卜素的提取以及以酶标仪定量检测叶绿素a、叶绿素b、总叶绿素、类胡萝卜素含量

。该试剂盒仅用于科研领域，不适用于临床诊断或其他用途。

操作步骤(仅供参考)：

自备材料：

1、蒸馏水

2、电子天平、研钵或匀浆器、离心管或试管

3、低温离心机、恒温箱或水浴锅、酶标仪、酶标板

操作步骤(仅供参考)：

1、准备样品∶

①植物样品︰取1g植物组织或水果中层果肉，加入2.5ml PAL Lysis Buffer，冰浴情况下充分捣碎研磨或匀浆，4℃ 10000r/min

离心15~20min，留取上清液，-20℃冻存，用于苯丙氨解氨酶的检测。

②血浆、血清和尿液样品︰血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于该试剂盒的测定，-20℃冻存，用于苯丙解氨的检测。

③细胞或组织样品∶取恰当细胞或组织裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，4℃ 10000r/min离心15~20min，取上清液，

-20℃冻存，用于苯丙酸解氨酶的检测。④高活性样品︰如果样品中含有较高活性的苯丙解氨酶，可以使用蒸馏水或PAL

Lysis Buffer稀释进行恰当的稀释。

2、PAL加样∶

取96孔板，按照下表设置对照孔、测定孔，溶液应按照顺序依次加入，并

注意避免产生气泡。如果样品中的PAL活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定，样品的检测最好能设置2平行孔，

求平均值。

加入物（μl）对照孔测定孔

蒸馏水150100

待测样本5050

PAL Assay Buffer-50

3、PAL检测︰

以对照孔为对照(调零)，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为   A测定0);40℃准确孵育1h，立即加入10μl PAL终止

液终止反应(备选方案)，以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定孔的吸光度(记为A测定1)。

注意︰加入PAL终止液终止反应为非必须步骤，可37℃准确孵育1h后直接以对照孔为对照调零，酶标仪立即测定290nm处测定

孔的吸光度。

注意事项∶

1、待测样品中不能含有酶抑制剂，同时需避免反复冻融。

2、获得上清液为PAL酶液，应尽快检测，亦可-20°℃保存。

3、如果没有可测定紫外区的酶标仪和酶标板，也可以使用紫外分光光度计和石英比色皿，但应注意比色杯的最小检测体积。

4、每次检测指标不宜过多，否则操作时间不一，有可能导致样本间的差异。5、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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