陶术  C0066  人 CD34 + 细胞富集试剂盒（阴性选择）

陶术 人 CD34+细胞富集试剂盒（阴性选择）

产品货号：C0066

产品名称：人 CD34 + 细胞富集试剂盒（阴性选择）

产品规格：2mL (for 1×10^9 cells)

产品简介：

TargetMol 的人 CD34+ 细胞分选试剂盒 (阴选) 提供超顺磁性微珠，采用阴性分选法，从人外周血单个核细胞（PBMC）中分离出 CD34+ 细胞。原理是选用生wu素（biotin）标记的单克隆抗体对非目标细胞（非 CD34+ 细胞）进行标记，然后通过链霉亲和素（streptavidin）标记的磁珠对非目标细胞进行清除，从而达到人外周血 CD34+ 细胞分选的目的。

具体产品的参数以收到产品说明书的参数为准

活性高：分选后细胞功能保持完好，无异常激活，无抗体和磁珠标记。

易操作：无需使用分离柱，通过磁力架即可实现目标细胞分离。

速度快：最快 30 min 即可完成 CD34+ 细胞富集。

富集效率高：一步富集可达到10倍浓缩，两步富集可达到 30 倍浓缩。

适用于从人脐带血单个核细胞（CBMC）或外周血单个核细胞（PBMC）中富集 CD34+ 细胞。

操作说明：

制备人CBMC或PBMC：通过Ficoll密度梯度离心法从人脐带血或人外周血中分离出单个核细胞，收集后用PBS洗涤细胞，离心。离心结束后，弃去上清液，将CBMC或PBMC重悬于分选缓冲液中，并调整细胞浓度至1×10^8个细胞/mL。

注：分选缓冲液推荐配方：PBS，含有2 mM EDTA和2% FBS；或PBS，2 mM EDTA和0.5% BSA。缓冲液需预先经0.22 μm滤膜过滤灭菌。

将100 μL的细胞悬液（含1×10^7个细胞）加入无菌流式管底部，再加入2 μL Biotin-Antibody Mix，混匀后在4°C下孵育10 min。

注：将细胞加入流式管底部时，避免沿管壁添加。若分选更多细胞，Biotin-Antibody Mix的用量需按比例增加。根据磁力架的不同，也可使用离心管进行细胞分选。

磁珠预处理：涡旋振荡重悬磁珠，将所需量的磁珠移至1.5 mL离心管中，加入1 mL分选缓冲液，10000 g离心1 min，弃去上清。重复以上洗涤步骤一次。加入与原体积相同的分选缓冲液重悬磁珠。若使用20 μL磁珠进行清洗，则清洗后用20 μL分选缓冲液重悬。

细胞孵育结束后，在流式管中加入20 μL经过预处理的Streptavidin Magnetic Beads，混合均匀，4°C下孵育10 min。

注：若分选的细胞数量较多，Streptavidin Magnetic Beads的用量需按比例增加。例如，分选5×10^7个细胞时，在500 μL细胞悬液中加入10 μL Biotin-Antibody Mix和100 μL Streptavidin Magnetic Beads。若分选的细胞少于1×10^7个，则应将细胞悬液体积补至100 μL，并加入2 μL Biotin-Antibody Mix和20 μL Streptavidin Magnetic Beads。

孵育结束后，在流式管中加入2.5 mL分选缓冲液，用移液器轻轻吹打混匀5次，避免剧烈振荡或上下颠倒混匀。

将装有细胞的流式管置于磁力架上静置5 min。

将含有纯化CD34+细胞的细胞悬液轻轻倒入无菌离心管中，倒出过程中流式管保持在磁力架上。500 g离心5 min，弃去上清，收集细胞。

注：为进一步提高CD34+细胞的富集效果，可根据实验需要重复步骤2-7一次。

根据实验要求洗涤细胞后，将其重悬于所需的缓冲液或培养基中，便可用于后续的分子生物学或细胞生物学实验。

保存条件：4℃，2年。

 陶术 人 CD34+细胞富集试剂盒（阴性选择）

产品订购信息：

C0066  人 CD34 + 细胞富集试剂盒（阴性选择）  2mL (for 1×10^9 cells)

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