Cy5 NHS Ester是一种广泛应用于生物分子标记和荧光成像的可见光荧光染料。Cy5（Cyanine5）是一种经典的近红外荧光染料，发射波长在可见光范围内，尤其适合多重荧光标记和高灵敏度检测。Cy5 NHS Ester包含一个NHS酯基团，能够与含有伯胺（-NH₂）基团的分子进行共价结合，形成稳定的酰胺键。这一特性使其成为蛋白质、抗体、核酸以及其他生物分子标记的理想选择。

2. Cy5 NHS Ester可见光荧光染料：核心特性与成分

2.1 Cy5染料特性

• 发射波长：Cy5染料的发射波长通常在650-670 nm之间，具有强烈的红色荧光，在可见光至近红外区域的荧光成像中表现出色，适合用于多重标记和检测。

2.2 NHS酯基团

• NHS酯基团：Cy5 NHS Ester中的NHS酯（N-羟基琥珀酰亚胺酯）能够与生物分子中的伯胺反应，形成稳定的共价键。这一反应通常在温和的条件下进行，且反应效率高，适合标记蛋白质、肽链、核酸等。

2.3 高灵敏度与低背景

• 高灵敏度：Cy5的高量子产率确保了在低浓度下也能产生强烈的荧光信号，适合检测微量生物分子。

• 低背景干扰：Cy5在远红区发射荧光，减少了生物样本中的自发荧光干扰，提供清晰的成像效果。

3. Cy5 NHS Ester可见光荧光染料：主要应用领域

3.1 蛋白质和抗体标记

Cy5 NHS Ester广泛用于蛋白质和抗体的标记，通过与蛋白质上的伯胺基团共价结合，生成稳定的Cy5标记分子。这一标记方法常用于免疫荧光、流式细胞术和Western blot等实验。

3.2 核酸标记

在核酸研究中，Cy5 NHS Ester用于标记DNA或RNA探针，通过标记核酸的末端或内部伯胺基团，便于在荧光原位杂交（FISH）和实时PCR等实验中进行检测。

3.3 多重荧光成像

Cy5染料的发射光谱远离常见的绿色或黄色荧光染料，使其成为多重荧光成像的理想选择。在复杂的生物样本中，Cy5可以与其他染料同时使用，实现多重标记和检测。

4. 使用方法

1. 溶液制备：将1mg Cy5 NHS Ester溶解在适当的无水有机溶剂（如DMSO）中，制备标记反应所需的工作溶液。

2. 标记反应：将Cy5 NHS Ester溶液加入到含有伯胺基团的生物分子溶液中，通常在pH 7.5-8.5的缓冲液中反应30分钟至1小时。温度控制在室温或4°C。

3. 去除未反应染料：通过透析、凝胶过滤或其他纯化方法去除未反应的Cy5染料，获得纯化的Cy5标记生物分子。

4. 荧光检测：使用适当的荧光显微镜或荧光光谱仪检测Cy5标记的生物分子的荧光信号，并进行数据分析。

5. 产品优势

5.1 高效标记能力

Cy5 NHS Ester能够在温和条件下高效标记含伯胺基团的生物分子，生成稳定的标记物，且标记效率高，适合多种生物分子的荧光标记。

5.2 强烈的荧光信号

Cy5染料在远红光区域发射强烈的荧光信号，具有高灵敏度，能够在复杂生物样本中提供低背景的清晰成像。

5.3 多功能应用

由于其良好的光学性能和广泛的生物相容性，Cy5 NHS Ester适用于从基础研究到临床诊断的多种应用场景，灵活性。

6. 注意事项

• 溶解与保存：Cy5 NHS Ester应溶解在无水DMSO或其他适当的有机溶剂中。未使用的染料应避光、低温（-20°C）保存，以保持活性。

• 反应条件优化：根据目标生物分子的特性，优化反应条件（如pH值、反应时间）以获得最佳的标记效果。

• 避免水分影响：在标记反应过程中，尽量避免染料与水接触，以防止NHS酯基团的水解失活。

7. 实验应用实例

在免疫荧光实验中，研究人员使用Cy5 NHS Ester标记特异性抗体，通过荧光显微镜清晰地观察到抗体在细胞中的分布。该染料的强荧光信号和低背景干扰使得研究人员能够精确地定位靶标蛋白，为细胞行为和分子相互作用研究提供了重要的视觉数据。

8. 总结

Cy5 NHS Ester 可见光荧光染料（1mg）是一种高效、可靠的生物分子标记工具，特别适用于蛋白质、抗体、核酸等生物分子的荧光标记和检测。其强烈的远红区荧光发射、低背景干扰以及良好的生物相容性，使其成为荧光成像、多重标记和分子检测中的理想选择。Cy5 NHS Ester为科学研究和临床应用提供了强大的支持，帮助研究人员在复杂生物体系中实现精确的荧光检测和成像。