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Applied Biosystems™ 7300 和 7500 实时荧光定量PCR仪器入门指南：相对定量测定

货号：4347824

实时荧光定量PCR（qPCR）作为分子生物学研究中的一种强大工具，已广泛应用于基因表达分析、病原体检测、基因分型和药物筛选等多个领域。赛默飞世尔科技旗下的Applied Biosystems™ 7300 和 7500系列实时荧光定量PCR仪器，凭借其出色的性能、简便的操作和强大的数据分析能力，成为众多实验室和研究机构的。本文将为您详细介绍这两款仪器，并着重讲解其在相对定量测定中的应用。

一、Applied Biosystems™ 7300 和 7500 实时PCR仪器概述

Applied Biosystems™ 7300 和 7500 实时PCR仪器是专为满足不同规模实验室需求设计的高性能设备。它们均集成了多通道荧光检测、精准温度控制和直观的数据分析软件，能够帮助科研人员进行快速、准确的核酸定量分析。

1.1 7300 和 7500 系列的区别

• 7300 实时荧光定量PCR仪器：7300型号为中小规模实验室设计，适合需要中等通量的研究。其系统采用96孔板，适合常规实验的定量分析。

• 7500 实时荧光定量PCR仪器：7500系列与7300的主要区别在于其优化的速度和灵活性，能够在更短的时间内完成PCR反应。7500可用于高通量实验，拥有更强的处理能力，特别适用于时间要求较高的实验室。

二、Thermo赛默飞实时荧光定量PCR仪器4347824：核心技术与特点

Applied Biosystems™ 7300 和 7500 系列实时荧光定量PCR仪器采用的核心技术确保了实验数据的高灵敏度、准确性和重现性。以下是其几大核心技术优势：

2.1 多通道荧光检测

这两款仪器均配备了多通道荧光检测系统，7300 配有四通道检测能力，而7500系列拥有五通道荧光检测功能。多通道荧光检测允许用户在同一个反应体系中检测多种目标基因，实现多重PCR的应用。多重检测极大地提高了实验的通量，同时节省了样本量和反应时间。

2.2 精确的热循环系统

PCR反应的关键在于精确的热循环控制。Applied Biosystems™ 7300 和 7500 实时PCR仪器内置高精度温度控制模块，确保每个PCR反应循环中的温度变化均一且稳定，减少了因温度波动造成的实验偏差，从而提高了PCR反应的重复性和可靠性。

2.3 用户友好的操作界面

这两款仪器均配备直观易用的软件界面，操作流程简便。其专属的qPCR软件能够自动化分析实验数据，支持多种分析模式，如绝对定量、相对定量、SNP分析和基因分型。即使是新手实验人员，也能够迅速掌握仪器操作流程，完成数据采集与分析。

2.4 兼容多种化学试剂

7300 和 7500 系列仪器均支持多种荧光染料和探针化学试剂，如SYBR Green、TaqMan探针和分子信标。这种广泛的兼容性为用户提供了高度灵活性，能够根据具体实验需求选择最佳的试剂和反应方案。

三、相对定量测定中的应用

相对定量PCR是一种广泛应用于基因表达分析的方法，通过与内参基因的比较来确定目标基因的相对表达水平。以下是Applied Biosystems™ 7300 和 7500 实时PCR仪器在相对定量测定中的应用方法和流程。

3.1 相对定量的原理

相对定量测定基于△△Ct方法（双重循环阈值比较法），其中Ct值代表PCR扩增达到荧光信号阈值所需的循环数。通过比较目标基因与内参基因的Ct值差异，可以计算目标基因在不同实验条件下的相对表达水平。

相对定量的计算公式为：

$$\text{相对表达量} = 2^{-\Delta \Delta Ct}$$

其中：

• $\Delta Ct = Ct_{\text{目标基因}} - Ct_{\text{内参基因}}$

• $\Delta \Delta Ct = \Delta Ct_{\text{实验组}} - \Delta Ct_{\text{对照组}}$

该方法能够精准反映基因表达在不同实验条件下的变化，适用于比较多个样本或实验条件下的基因表达差异。

3.2 实验步骤

1. 样本准备

在相对定量PCR实验中，首先需要从实验样本（如组织或细胞）中提取高质量的RNA，然后通过逆转录反应将RNA转化为cDNA。为了确保实验结果的准确性，RNA样本必须保持纯净，避免蛋白质、DNA或有机溶剂的污染。

2. qPCR反应体系配置

使用Applied Biosystems™ 7300 或 7500仪器，qPCR反应体系通常包括：

• 目标基因和内参基因的引物

• cDNA模板

• 荧光探针（如TaqMan探针）或SYBR Green染料

• PCR酶和缓冲液

确保引物设计合理，能够特异性扩增目标基因和内参基因的片段，同时引物退火温度优化到最佳，以提高反应的扩增效率。

3. 设置实验条件

在Applied Biosystems™ 7300 或 7500系统中，用户可以轻松设置PCR循环参数，包括预变性、退火和延伸步骤。根据具体实验的优化情况调整退火温度和循环次数，确保高效的扩增。

4. 数据采集与分析

qPCR反应完成后，系统会自动生成Ct值。通过内置的软件，用户可以轻松地利用△△Ct方法进行相对定量分析。数据分析过程中，需确保内参基因的Ct值在不同样本间保持相对稳定，才能确保相对定量结果的准确性。

3.3 数据标准化与内参基因选择

在相对定量PCR实验中，数据标准化是非常关键的一步。通常使用内参基因来校正样本间的差异，常见的内参基因包括GAPDH、β-Actin和18S rRNA等，这些基因在不同实验条件下的表达通常保持稳定。在进行实验设计时，选择适合的内参基因能够显著提高相对定量结果的准确性。

四、Thermo赛默飞实时荧光定量PCR仪器4347824：应用实例

4.1 基因表达研究

在基因表达分析中，Applied Biosystems™ 7300 和 7500 实时PCR系统被广泛应用于检测特定基因在不同组织、发育阶段或实验条件下的表达水平。例如，在癌症研究中，科研人员可以利用这些仪器分析肿瘤组织中与癌症相关基因的表达变化，揭示潜在的分子机制。

4.2 病原体检测

7300 和 7500 系列仪器在病原体检测方面表现优异，尤其是在病毒或细菌核酸检测中。相对定量方法能够帮助临床研究人员量化病原体的感染水平，为疾病诊断和防控提供有力的支持。

4.3 药物筛选与毒性评估

在药物筛选过程中，研究人员经常使用7300 和 7500 实时PCR系统分析药物处理后细胞中基因表达的变化，以评估药物的效果和毒性。这种应用尤其适用于高通量筛选研究，通过多重qPCR检测多个基因，快速评估药物对不同基因的调控作用。

五、优势与应用前景

5.1 高灵敏度与高特异性

Applied Biosystems™ 7300 和 7500 实时PCR系统的高灵敏度能够检测到微量的核酸，并精确量化其表达水平。这在分析低丰度基因表达时尤为重要，能够提供可靠的实验结果。

5.2 多重检测与高通量应用

多重荧光检测功能使得7300 和 7500 系列能够在一次反应中同时检测多个基因，大大提高了实验效率，减少了样本和试剂的用量。