传统分离膜蛋白的方法繁琐而耗时，并且都需要梯度分离和昂贵的超高速离心仪器。而Thermo Scientific Mem-PER真核细胞膜蛋白抽提试剂盒是一种快速、简单、便宜的膜蛋白分离方法。使用该试剂盒的三种试剂可以从培养的哺乳动物、酵母细胞以及软或硬的哺乳动物组织中抽提并选择性地富集膜蛋白。
产品特点：
- 的降低了亲脂（膜）蛋白组份中参杂的亲水性蛋白的交叉污染(一般< 10%)。
- 适用于多种培养的哺乳动物细胞、酵母细胞以及哺乳动物组织。
- 与SDS-PAGE、蛋白免疫印迹, 蛋白定量分析等下游应用兼容(详见相关产品)。
- 提供简单完整的方法，使用该方法可以在大约1小时以内从哺乳动物细胞、组织以及酵母细胞中分离膜蛋白。
- 仅需台式微量离心机和离心管。
使用Thermo Scientific Mem-PER 真核细胞膜蛋白抽提试剂盒来溶解和分离酵母膜内蛋白(酿酒酵母菌株EGY-194)。向湿重大10-15mg的细胞沉淀中加入80μlMem-PER 试剂 A和100-150mg、尺寸为405-600μm的酸洗玻璃珠并在室温涡旋10分钟来破裂酵母细胞的细胞壁。短暂离心收集玻璃珠，然后将细胞裂解物转移到新的离心管中并将离心管置于冰上。用720 μl Mem-PER试剂B和C洗涤收集的玻璃珠然后将洗涤液加入到细胞裂解液中并在冰上孵育30分钟。样本进行4-12%Bis-Tris凝胶电泳。
分别对从大鼠肝（图A）和大鼠心（图B）制备的膜蛋白进行蛋白免疫印迹。利用蛋白免疫印迹对通过Mem-PER 试剂制备的疏水（膜蛋白）成分和相应的亲水成分进行分析，分别对VDAC (31 kDa, Affinity BioRegeants),cellugyrin (29 kDa, BDTransduction Laboratories)及flotillin-1 (48 kDa, BD Transduction Laboratories)进行免疫印迹分析。M = 膜蛋白组份，H =亲水组份。
对Thermo Scientific Mem-PER 试剂溶解的蛋白进行分级。使用Mem-PER真核细胞膜蛋白抽提试剂盒对三种细胞系的蛋白进行溶解和抽提。每组疏水（膜蛋白）和亲水组分均通过标准操作获得，利用蛋白质免疫印迹分析四种细胞定位已知的蛋白。利用SDS-PAGE/蛋白质免疫印记分析对COX4进行分析之前，使用SDS-PAGE样品制备试剂盒去除膜组分中的去垢剂。所有碎片组分中检测到的蛋白污染量极低。缩写: AchE = 乙酰酯酶, COX4 =细胞色素氧化酶4亚基,hsp90 =热休克蛋白90, M = 可溶性膜蛋白组分，H = 亲水性蛋白组分。
参考文献
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