ODIPY™ 581/591 十一烷酸可用于检测细胞和细胞膜中的活性氧 (ROS)。 染料的多不饱和丁二烯基部分的氧化导致荧光发射峰从∼590 nm移动到∼510 nm。 在还原状态下，BODIPY™ 581/591 十一烷酸的激发和发射值为 581/591 nm； 氧化后，激发和发射值移至 488/510 nm。

该产品我们建议用高质量无水 DMSO 溶解，母液浓度 1 至 10 mM，≤−20°C 避光保存。

BODIPY™ 581/591 C11 检测脂质过氧化的原理

BODIPY™ 581/591 C11的分子结构如图2所示，染料的多不饱和丁二烯基部分（红色虚线框）可与ROS发生反应，导致染料的荧光发射峰从∼590 nm移动到∼510 nm。 在还原状态下，BODIPY™ 581/591 C11的激发和发射值为 581/591 nm，呈现红色荧光； 经氧化后，激发和发射值移至 488/510 nm，呈现出绿色荧光。

图2. BODIPY™ 581/591 C11 检测脂质过氧化的原理²

BODIPY™ 581/591 C11染料使用方法

染料溶解与保存：

BODIPY™ 581/591 C11的分子量为504.4 g/mol。1 mg染料可以使用198 µl 高质量无水DMSO溶解成10 mM母液，溶解好的母液于-20 ℃分装避光保存，避免反复冻融。

染色流程：

染料的推荐工作液浓度为1-10 µM，可以使用培养基进行稀释，孵育时间建议为30分钟，的工作浓度和孵育时间需要根据实验体系进行调整。具体染色流程请参考图3。

图3. BODIPY™ 581/591 C11染料使用流程

BODIPY™ 581/591 C11结果分析

BODIPY™ 581/591 C11适用于多种分析方法（流式细胞仪、荧光显微镜、高内涵），比较常用的是流式细胞仪和荧光显微镜。下面，我们分别以这两种检测平台为例，介绍一下结果分析方法。根据染料的光谱性质，我们可以使用以下通道来进行检测：

*在使用流式细胞仪检测还原态时，需要使用561nm激光器激发的PE通道来检测。对于PE通道使用488nm激光器激发的流式细胞仪，建议只检测FITC通道的信号（如同时检测FITC和PE通道，两个通道之间存在干扰，导致结果不准确），这也是大多数文献中所使用的方法。

流式细胞仪检测结果

典型的流式数据如图4所示,仅使用FITC通道检测氧化态，使用直方图对数据进行分析。与对照组对比，经诱导脂质过氧化后，染料氧化态增加，FITC通道荧光强度增强，信号峰右移（图4A），也可以对氧化态平均荧光强度进行统计比较（图4B）。

图4. BODIPY™ 581/591 C11检测脂质过氧化流式结果分析

 Hypoxia–reoxygenation (HR)诱导脂质过氧化，RLX处理抑制脂质过氧化的产生。³

荧光显微镜检测结果

典型的荧光显微镜成像结果如图5所示，分别使用FITC和Texas Red通道来检测染料的氧化态和还原态。经诱导产生脂质过氧化后，绿色信号增强（图5A）。在统计时，使用氧化态与还原态荧光强度的比值来对不同的实验组进行比较（图5B）。氧化态/还原态比值越高，说明脂质过氧化程度越高。

图5. BODIPY™ 581/591 C11检测脂质过氧化成像结果分析⁴

脂质过氧化染料常见问题解析

问：BODIPY™ 581/591 C11荧光探针可以兼容固定吗？

答：BODIPY™ 581/591 C11荧光探针适用于活细胞检测，不兼容固定。此外，该染料也不能用于固定后的样品。

问：样品中含有GFP荧光蛋白，还可以使用BODIPY™ 581/591 C11荧光探针吗？如不能，有其他产品推荐吗？

答：由于BODIPY™ 581/591 C11荧光探针在氧化态时呈现绿色，与细胞中的GFP冲突，因此不建议在含有GFP的样品中使用此探针检测脂质过氧化。向您推荐B3932，其可以兼容GFP，在还原态时，激发和发射光波长分别为665/676 nm，被氧化后激发和发射光波长会变成580/605 nm。

参考文献

1. van Eck, H. J. N., Akkermans, G. R. A., Alonso van der Westen, S., Aussems, D. U. B., van Berkel, M., Brons, S., Classen, I. G. J., van der Meiden, H. J., Morgan, T. W., van de Pol, M. J., Scholten, J., Vernimmen, J. W. M., Vos, E. G. P., & de Baar, M. R. (2019). High-fluence and high-flux performance characteristics of the Superconducting Magnum-Psi Linear Plasma Facility. Fusion Engineering and Design, 142, 26–32. 

2. Wang, F., Naowarojna, N., & Zou, Y. (2022). Stratifying ferroptosis sensitivity in cells and mouse tissues by photochemical activation of lipid peroxidation and fluorescent imaging. STAR Protocols, 3(2), 101189. 

3. Nistri, S., Fiorillo, C., Becatti, M., & Bani, D. (2020). Human relaxin-2 (serelaxin) attenuates oxidative stress in cardiac muscle cells exposed in vitro to hypoxia–reoxygenation. evidence for the involvement of reduced glutathione up-regulation. Antioxidants, 9(9), 774. 

4. Murray, M. B., Leak, L. B., Lee, W. C., & Dixon, S. J. (2023). Protocol for detection of ferroptosis in cultured cells. STAR Protocols, 4(3), 102457.