现在商品化的液相色谱柱琳琅满目,根据色谱柱的参数可以给我们提供一个初步的选择,但由于各个仪器厂商的填料技术和键合技术都有差异,即使是C18液相色谱柱,同一品牌不同系列都有不同的功能,有能耐受低PH值的、耐受高温、耐受纯水相和适合碱性分离等等。所以在使用色谱柱之前需要好好阅读产品说明手册,才能找到满意的分离条件。
C18液相色谱柱的保养
1.色谱柱应轻拿轻放,避免碰撞振动,放置和归还时,相应上机人员应确认保存在合适的溶剂中,并确认色谱柱两端的堵头已旋紧。
2.色谱柱压力升高时,应按照“标题三”步骤进行维护,色谱柱维护应在色谱柱档案备注中注明。
3.当出现色谱柱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰及柱效下降时。应按照“标题四”原则进行色谱柱再生,色谱柱再生应在色谱柱档案备注中注明。
4.当色谱柱维护及再生后,柱效、柱压仍然不满足要求,则上报相关负责人,经负责人评估后认为确需报废的应在色谱柱档案中做好报废记录,报废后的色谱柱应专门存放,以便将来可以利用其填料修复被严重污染的色谱柱。
C18液相色谱柱
建立新化合物分离分析方法的色谱柱选择
根据目标分析物的分子量大小、溶解性、Pka值,以及分离要求、仪器、成本等各方面来选择色谱柱。
(1) 根据分离目的选色谱柱,对映体分离常选择手性柱,离子化色谱可选择离子柱,蛋白多肽、DNA可选择凝胶柱或离子交换柱,一般的小分子化合物可选择普通反相柱,如C18、C8柱、苯基柱等等。
(2) 根据实际需求和设备选择填料粒径,普通HPLC一般选择5μm或3.5μm粒径的色谱柱,而UPLC则常使用1.7μm——3.5μm的色谱柱。
(3) 比表面积,高比表面积有助于分离,低比表面积更适合梯度洗脱程序。
(4) 孔径,大分子化合物适合大孔径,在保证比表面积的前提下,选择孔径大的。
(5) 键合相的选择