细胞实验之成年小鼠关节软骨细胞原代培养步骤

原代培养是指直接从组织或器官中分离出细胞进行培养的方法，它能够保持细胞的原始特性。

以下是根据最新信息进行细胞实验之成年小鼠关节软骨细胞原代培养的步骤：

  1. 动物处死和组织采集：

    1.1 使用C57小鼠，年龄在8-10周之间。通过颈椎脱位处死后，使用75%乙醇进行消毒，并在无菌条件下操作。

    1.2 从小鼠体内分离大腿腿骨，去除筋膜、肌肉和结缔组织，以获取关节软骨组织。

  2. 软骨组织的处理：

    2.1 将软骨组织 制成小于1mm³的小块，并使用含有2%双抗的PBS进行清洗。

    2.2 使用剪刀将软骨帽剪成约1mm³的碎片，并加入预热的Collagenase D进行消化。

  3. 消化和细胞分离：

    3.1 将含有软骨碎片的管放入37℃、80rpm的摇床中进行消化，第一次消化时间为2小时。

    3.2 消化结束后，使用含血清的培养基终止消化，并通过40μm细胞筛过滤，离心收集细胞。

    3.3 对未消化的组织进行第二次消化，同样使用预热的Collagenase D，消化时间也为2小时，然后收集细胞。

   4. 细胞培养：

    4.1 将收集的细胞用DMEMwanquan培养基重悬，计数后种植在24孔板中。

    4.2 培养24小时后更换新鲜的wanquan培养基，继续培养。

       在进行原代培养时，需要特别注意无菌操作，以避免细胞污染。此外，培养条件（如温度、CO2浓度和培养基的成分）对细胞的生长和存活至关重要。在实验

过程中，应严格遵守实验室的安全规程和操作指南。