TMB单组分显色液使用方法

目前酶免疫分析（EIA）技术，已被广泛应用于抗原，半抗原或抗体的定量或定性检测分析。辣根过氧化物酶（HRP）及其偶联物是酶联免疫分析技术中常用的一种酶，由于3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）在HRP的显色反应体系中，比其它色原具有更高的灵敏度且无至癌性而被广泛应用。TMB主要应用于酶联免疫吸附实验（ELISA），免疫斑点杂交或者免疫组化以及氯和过氧化氢的检测分析。为了满足不同的试剂盒产品研发与生产以及科研需求，本公司专门研制了针对不同类型的基于HRP的免疫分析用TMB显色液。

TMB单组分显色液特点：    

即用型：无需混合，方便快捷，减少误差   

灵敏度高：不低于A.、B液  

 稳定性好：2-8℃保存，有效期不低于36个月；显色终止后读数稳定   

背景低：底物溶液在650nm检测时检测OD值小于0.04   

质量可靠：产品批间差异小   

外观：本试剂一般情况下为无色，有时略显浅蓝色或浅黄色

TMB单组分显色液使用方法：     

用适当的干净容器（用纯净水反复冲洗），倒出适量的单组分TMB显色液，待达到室温后即可使用。

加液：加完HRP结合物并孵育一定时间后，用适当洗涤液洗板3-5次，每孔加TMB显色液100ul。 根据个人实验需要，在室温（15-25℃）或37℃下避光温育10-30分钟或更长时间，直至显色至预期深浅。

终止：加入等体积的1M 盐酸或硫酸溶液终止反应，孔中反应液由蓝色变为黄色。

读数：终止反应后30分钟内在450nm处测定吸光值。

注意：如果出现高的反应背景或沉淀，表明TMB底物反应过于强烈。为了避免产生沉淀，可在终止后马上读数；或者进一步稀释一抗和/或HRP结合物。