上海华壹生物科技有限公司
2016/11/15 10:39:08质粒小提试剂盒为什么没有提出质粒或者质粒浓度很低?
菌种老化
建议:对于甘油保存的菌种,需要*行活化。涂布或者划线菌种,重新挑选单菌落进行液体培养,并对菌种进行初摇活化,按照1:500的比例进行菌种培养。二次培养细胞不要超过16小时。
质粒丢失
建议:某些质粒在多次继代培养的过程中会出现丢失的现象,另外检查筛选抗生素的浓度是否正确。
裂解不充分
建议:如果采用超过推荐量的菌体进行质粒制备,会导致菌体裂解不充分。可适当减少菌体的用量或者相应增大各种Buffer的用量。请根据选取的试剂盒,处理相应量的细菌量。
Buffer中有沉淀未溶解
建议:Buffer B和Buffer C在温度较低时会出现沉淀,使用前请检查是否有沉淀生成,如有沉淀生成,请置于37℃温育片刻,待溶液澄清后使用。
DNA Wash Buffer中未按要求加入乙醇
建议:按照说明书要求加入要求量的无水乙醇,使用后旋紧瓶盖,防止乙醇挥发。
溶解液pH值不正确
建议:将DNA从柱子上溶解下来的zui适pH值在7.0~8.5之间,如果溶解液的pH超出此范围将会显著影响溶解效果,请使用试剂盒配套的Elution Buffer(pH 8.5,10 mM Tris-HCl)进行溶解,如果用ddH2O或者其他溶液进行溶解,请确保pH在7.0~8.5之间。
溶解体积及时间的选择
建议:溶解体积将会影响zui终的收获量,溶解体积越大,收获量越高,但是浓度将会降低。请使用试剂盒推荐的溶解体积进行溶解,以保证的收获量和浓度。如果需要高浓度的质粒,请减少溶解体积。另外,如果想收获高浓度高收获量的质粒,可进行二次溶解。
建议:加入Elution Buffer后,室温放置2~5 min,更有利于溶解。
质粒纯度不高
蛋白质污染OD260/ OD280<1.8
建议:选择推荐量的菌体,离心后小心吸取上清,如果上清液中混有悬浮物,可再次离心,以*去除蛋白质。
RNA污染OD260/ OD280>2.0
建议:检查配送的RNase A是否*加入到Buffer A中,加入RNase后,Buffer A/RNase应该存放在4℃,如果存放时间过长,或者没有正确存放,请重新加入RNase。
基因组DNA污染
建议:加入Buffer B后,轻轻颠倒混匀,避免剧烈震荡涡旋,加入Buffer B的处理时间不要超过5 min。
注:内容供参考,具体产品信息请来电或在线咨询。
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