CRISPR (clustered, regularly interspaced, short palindromic repeats)是一种来自细菌降解入侵的病毒 DNA 或其他外源 DNA 的免疫机制。在细菌及古细菌中，CRISPR系统共分成3类，其中Ⅰ类和Ⅲ类需要多种CRISPR相关蛋白（Cas蛋白）共同发挥作用，而Ⅱ类系统只需要一种Cas蛋白即可，这为其能够广泛应用提供了便利条件[1]。
目前，来自Streptococcus pyogenes 的CRISPR-Cas9系统应用。Cas9 蛋白（含有两个核酸酶结构域，可以分别切割DNA 两条单链。Cas9首先与crRNA及tracrRNA结合成复合物，然后通过PAM序列结合并侵入DNA，形成RNA-DNA复合结构，进而对目的DNA双链进行切割，使DNA双链断裂。
由于PAM序列结构简单（5’-NGG-3’），几乎可以在所有的基因中找 到大量靶点，因此得到广泛的应用。CRISPR-Cas9系统已经成功应用于植物、细菌、酵母、鱼类及哺乳动物细胞，是目前zui的基因组编辑系统[1]。
通过基因工程手段对crRNA和tracrRNA进行改造，将其连接在一起得到sgRNA（single guide RNA）。融合的RNA具有与野生型RNA类似的活力，但因为结构得到了简化更方便研究者使用。通过将表达sgRNA的原件与表达Cas9的原件相连接，得到可以同时表达两者的质粒，将其转染细胞，便能够对目的基因进行操作
CRISPR与RNAi的区别：
| 方法 | 靶标 | 质粒构件 | 基因下调 | 基因敲除 | 基因定点突变或多点突变 | 基因组改变 | 遗传密码子改变 | 表型改变 |
| RNia(siRNA,shRNA | mRNA(转录水平） | 简单 | YES | NO | NO | NO | NO | |
| CRISPR | DNA序列（基因组水平） | 简单 | YES | YES | YES | YES | YES | |
| TALEN | DNA序列（基因组水平） | 复杂 | YES | YES | YES | YES | YES |
技术优势： ※操作简单，靶向性更高。
※可实现对靶基因单个位点或多个位点同时敲除。
※也可同时对多个靶基因进行敲除。
※可应用于任何物种。
※CRISPR/Cas9系统是由RNA调控的对DNA的修饰，其基因修饰可遗传。
※拥有CRISPR/Cas9腺病毒/慢病毒系统，对分裂期和非分裂期细胞均有感染作用。
客户提供：
1.物种、基因名称或者基因ID；
2.提供靶细胞。
