抗双链DNA（ds-DNA）抗体检测
抗双链DNA（ds-DNA）抗体对SLE有较高的特异性，因此美国及中国对SLE的诊断标准中都已列入抗ds-DNA测定。检测抗ds-DNA的方法很多，如免疫沉淀（双向扩散与对流免疫电泳）、间接血凝、间接荧光抗体（DNA斑点法、短膜虫法）、间接酶标抗体染色（短膜虫）、ELISA、RIA等。现应用较多的是RIA（Farr法）、ELISA、间接荧光抗体（短膜虫）法（CL-IFA）。
兰小鹏等（1994）以纯化的大肠杆菌质粒ds-DNA为抗原，利用亲合素—生物素系统（BAS），将其结合在硝酸纤维素（NC）膜上，建立了一种新型的检测ds-DNA抗体的斑点免疫结合试验（dot immunobinding assay，DIBA）。DIBA的敏感性优于CL-IFA，特异性优于ELISA试剂盒。DIBA检测ds-DNA快速、简便、可靠，如有试剂盒供应，可作为检测ds-DNA抗体的常规方法。现将DIBA检测ds-DNA法介绍如下。
1．试剂 生物素化质粒ds-DNA：将含质粒pBR332的大肠杆菌在含氨苄青霉素的LB培养基中扩增，取纯培养物用MagicTM DNA纯化系统，按Promega公司所附操作说明书提取质粒ds-DNA。取纯化的不含单链DNA的大肠杆菌质粒ds-DNA直接与长臂光敏生物素混合，用光标记灯进行光照标记，以制备生物素化质粒ds-DNA。可参考以下步骤：在一灭菌EP管中加待标记DNA 5ug／10uL，在暗室中加入5ug／uL光敏生物素，充分混匀，置冰浴中。
在特制光源下10cm处照射20min。加入100mmol／LTris-HCl，pH9．0（含0．1mmol／LEDTA）10uL，混匀。再加入等体积仲丁醇，混匀。离心lmin（10 000r／rain），吸去上层仲丁醇，弃去。再加入仲丁醇25uL，重复提取游离的光敏生物素。吸去上层无色仲丁醇后，加入5uL3mol／L醋酸钠，充分混匀，加入冷*100gL充分混匀，沉淀标记的DNA，置-20℃过夜（或-70℃l5min），15 000r／min离心20min，沉淀物再用70％乙醇洗1次，离心，抽干，溶于0．1mmol／LEDTA或TK中，测定探针浓度，分装，保存于-20℃。
2．操作步骤
（1）DIBA反应板制作 取厚约0．5mm的硬质透明胶片，用打孔器打直径为3mm的圆孔，在胶片一面贴透明胶纸，取与胶板上的圆孔等大的NC片，嵌贴人上述胶板的孔内即成DIBA微量反应板。NC片经0．01mol／L，pH7．4PBS湿润后，加入如L亲合素（50ug／mL），37℃干燥。再加生物素化的质粒ds-DNA（25ug／mL），37％30min，用含3％BSA的PBS封闭30min；经含0．05％Tween-20的PBS漂洗后，吹干，置冰箱保存备用。
（2）标本检测 在上述NC片上加入用含3％BSA的PBS 1：40稀释的待检血清，37℃反应30rain，振荡漂洗；加羊抗人ISC-HRP（1：100），37~Clh；漂洗后加底物（DAB-H20），显色。
（3）结果判定 以NC片*出现棕色斑点为阳性，阳性强弱以出现棕色斑点的血清zui高稀释度表示，血清1：40稀释时*不显色则为阴性。
3．临床意义 抗ds-DNA抗体的检测对于SLE的诊断和治疗监控极为重要。其他结缔组织性疾病患者抗ds-DNA也可出现阳性，但此类病人一般是SLE重叠综合征，故抗ds-DNA抗体是SLE诊断标准之一。
