固相萃取小柱的选择

1．固相萃取柱的选择

1. 柱填料的选择

根据目标化合物与干扰物的差异，如极性，分子量，pka值等，选择合适的填料。

2 固相萃取柱规格的选择

对于反相、正相和吸附型固相萃取柱来说，被萃取样品的质量不超SPE柱填料的5%；

离子交换型的固相萃取柱，必须考虑离子交换的容量。SAX和SCX其吸附容量为0.2mg/g，下表附SPE小柱的容量和洗脱参数

SPE柱上样容量和洗脱体积的选择

3．选择合适的固相萃取方法

固相萃取的保留机制可分为两种：

3-1 吸附剂（填料）保留目标化合物：绝大多数化合物应用此机制，填料保留其目标组分及少量杂质，通过淋洗步骤去除吸附在柱上的少量杂质，zui后选择合适的（洗脱）溶剂把目标组分洗脱下来。

根据吸附剂的保留机理可进一步分为：

（1）反相（C18,C8,CN,Phenyl,C4,C1）

1. 分析物：非极性至中等极性
2. 基质：水溶性
3. 方法：

a.活化：通常用水溶性有机溶剂如甲醇活化，然后用水平衡

b.淋洗：含0-50%极性溶剂的缓冲溶液淋洗杂质

c.洗脱：极性或非极性溶剂洗脱目标物

（2）正相（Silica, Florisil,Diol,NH₂）

1. 分析物：中等极性到强极性
2. 基质：非极性至中等极性
3. 方法：

a.活化：非极性有机溶剂

b.洗脱：非极性有机溶剂

 反相溶剂洗脱强度：

己烷

异辛烷

四氯甲烷 

氯fang 

二氯甲烷

四氢呋喃

乙mi

乙酸乙酯

丙酮

乙腈

异丙醇 

甲醇

水

（3）阳离子交换（SCX,PRS,COOH）

1. 分析物：阳离子（碱性）化合物
2. 方法：
3. 1.活化：用于非极性有机溶剂中的样品时，可用样品溶剂来活化；在用于极性溶剂中的样品时，可用水溶性有机溶剂过柱后，然后用水平衡，zui后再用适当pH值的缓冲溶液进行平衡。

• 2.上样：样品溶液pH值要小于其pKa两个单位（以保证其带电荷 ）
• 3.洗脱：洗脱溶液pH值要大于其pKa两个单位（中和分析物的电荷）
•  

（4）阴离子交换（SAX,PSA,NH2，PAX/MAX ）

• 分析物：阴离子（酸性）化合物
• 方法：
• 1.活化：用于非极性有机溶剂中的样品时，可用样品溶剂来活化；在用于极性溶剂中的样品时，可用水溶性有机溶剂活化后，然后用水平衡，zui后再用适当pH值的缓冲溶液进行平衡。
• 2.上样：样品溶液pH值要大于其pKa两个单位（以保证其带电荷 ）。
• 3.洗脱：洗脱溶液pH值要小于其pKa两个单位（中和分析物的电荷）。

3-2 吸附剂（填料）保留杂质：食品中色素等杂质的去除多用此机制。填料保留杂质而不保留或只保留极少量的目标组分，所以上样后即开始收集目标组分，zui后用目标物所在的溶剂进一步洗脱。合并两部分收集液。

1）．活化：以样品所在的有机溶剂进化活化，1-2柱管体积

2）．上样：提取液转移至柱内，并收集流出液

3）．洗脱：用样品所在的有机溶剂进一步洗脱，收集流出液。合并上样和洗脱流出液。

附：固相萃取中常见物质和处理方法