金秋时分,分享操作ELISA试剂盒的实验重要点

ELISA试剂盒应严格遵照规则操作，必能得出的成果。首先应选取的试剂，杰出的仪器和正确的操作是确保ELISA实验成果牢靠的必要条件。所以ELISA试剂盒的购买试剂质量的确保以及实验前实验仪器的查看都是很重要的。
一、标本的收集及保存
1、血清：全血标本请于室温放置2小时或4℃过夜后于1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应防止重复冻融。
2、血浆：可用EDTA或肝素作为抗凝剂，标本收集后30分钟内于2 - 8° C 1000 x g离心15分钟，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应防止重复冻融。
3、细胞培养物上清或其它生物标本：请1000 x g离心20分钟，取上清即可检测，或将标本放于-20℃或-80℃保存，但应防止重复冻融。
4、样本处理：血清或血浆标本推荐稀释10,000倍。
注：以上标本置4℃保存应小于1周，-20℃或-80℃均应密封保存，-20℃不该超越1个月，-80℃不该超越2个月；标本溶血会影响终究检测成果，因而溶血标本不宜进行此项检测。
二、试剂的预备 
按试剂盒说明书的要求预备实验中需用的试剂. ELISA试剂盒中用的蒸馏水或去离子水,包括用于洗刷的,应为新鲜的和高质量的.自配的缓冲液运用pH计丈量较正.从冰箱中取出的试 验用试剂应待温度与室温平衡后运用.试剂盒中本次实验不需用的部分应及时放回冰箱保存。
 三、加样：别离设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其他各步操作相同）、规范孔、待测样品孔。在酶标包被板上规范品加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品终究稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，悄悄晃动混匀。
四、温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
五、洗刷：当心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗刷液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
六、显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，悄悄震动混匀，37℃避光显色15分钟.
七、测定：以空白空调零，450nm波长依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加停止液后15分钟以内进行。
叙述完了以上ELISA试剂盒实验的操作要点，能够发现其实许多过程都并不杂乱，重要的是操作的时分一定要重视细节，熟能生巧，才能够把握ELISA实验的精华地点。