技术文章

一、要求

1、熟悉细胞周期的基本概念、原理，掌握实验操作的流程和方法。

2、观察流式细胞仪检测、分析细胞周期的各种峰形图的意义。

3、了解细胞周期测定实验的用途。

二、原理

细胞周期是指从一次细胞分裂结束到下一次分裂结束所经历的时间。细胞周期反映了细胞的增殖速度，周期越短说明细胞的增殖速度越快。测定细胞周期的方法很多，有同位素标记法、细胞计数法和流式细胞仪测定法等。流式细胞仪测定法是利用溴化乙锭（PI）渗入测定细胞周期的方法。溴化乙锭加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含溴化乙锭的DNA将占l/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。细胞如果仅经历了一个周期，则两条单体均深染。计分裂相中各期比例，就可算出细胞周期的值。

三、材料

1、秋水仙素。

2、溴化乙锭（1.0mg/ml）。

3、无水乙醇。

4、RPMI1640*培养基。

5、RNase A (1mg/mL)。

6、PBS。

7、6孔细胞培养板。

8、离心机。

9、流式细胞仪。

10、细胞培养箱。

四、方法

1、取1×106对数生长期的细胞接种于6孔板，调整好细胞生长状态。

2、离心收集细胞，弃上清，用预冷PBS洗涤两次。

3、加入预冷70％乙醇0.5ml，于4℃固定30分钟。

4、离心收集细胞，取1mL PBS洗涤一次，加入0.2ml反应液(含50靏/mL溴化乙锭，100靏/mL RNase A和0.2% Triton X-100 的PBS)，4℃避光孵育30分钟。

5、PBS洗涤两次，用流式细胞仪检测分析。

五、注意事项

1、实验操作过程中动作要尽量轻柔，不可用力打碎细胞。

2、RNA酶现加，以*去除细胞中RNA的干扰。

3、溴化乙锭是光敏物质，操作过程中注意避光。

4、zui后一步的洗涤应尽量弃净上清，以免游离PI残留影响实验结果。

   上述文献仅供参考，不作为实验依据，具体详情需要自行实验数据理论为基准，上海青旗是一家集产品，技术，服务，售后等一站式的生物公司，为广大科研人员提供各类血清；动/人正常/人肿瘤细胞；ATCC标准菌株等。我们的宗旨是以：高品质、低价格、供货快、售后好为基准，为广大科研实验工作者提供的服务。