实验室透析常见问题解答（一）
Q1：如何准备透析膜管？
透析膜管的准备因膜管材质和生产工艺的差别而有所不同。注意，我们不推荐煮沸处理，因其可能损坏膜管并改变膜孔径。
Q2：透析的原理是什么？一般需要多长时间才能完成？
透析是指溶质在浓度梯度的驱使下，选择性扩散通过半透膜，从而达到大/小分子分离，膜两侧浓度平衡，即小颗粒的溶质通过膜，而大分子物质不能通过，被截留在膜另一边。
如果将样品置于透析膜管内，通过置换膜管外部的透析缓冲液，可将小颗粒物质清除，从而达到纯化大分子物质的目的。一般来说，一天之内置换3-5次缓冲液，然后在室温条件下，放在搅拌台上隔夜透析，即可达到的透析结果。标准的透析操作一般需要16-24小时。许多因素会影响透析效率，包括：扩散系数、pH值、温度、时间、物质浓度、样品体积、透析缓冲液体积、透析缓冲液的置换次数、膜表面积、膜厚度、分子带电荷及缓冲液搅拌速率。
Q3：透析一个样品需要多少体积的透析缓冲液？缓冲液置换频率怎么安排？
透析缓冲液的体积越大，小分子扩散的驱动力越大。我们一般推荐缓冲液和样品的体积比为100:1。当扩散速率降低，膜两侧溶液趋于平衡时，通过置换缓冲液，可维持小分子扩散驱动力和透析速率。我们一般推荐在12-24小时内，置换缓冲液2到3次，具体安排如下：
*次缓冲液置换：透析开始后2-3小时
第二次缓冲液置换：透析开始后4-5小时
zui后一次缓冲液置换：透析隔夜之前
Q4：如何选择正确的截留分子量（MWCO）？
截留分子量应该竟可能的大，以使透析速率zui大化。但是，为了获得zui大的样品回收率，选择的截留分子量应至少为需纯化的大分子物质分子量的一半。对于需对几种分子进行分离的应用，分子之间的分子量差至少为5倍，才能完成有效的膜透析。若不能满足分子量差的要求，可能需要使用其它的分离技术，如色谱方法或切向流过滤。
Q5：哪种膜的蛋白质结合率zui低？
每种膜对不同的分子具有不同的亲和性。对于球状蛋白，相对的结合亲和性由低到高为CE< RC
Q6：怎样为膜管选择合适大小的膜夹？
标准RC膜（Spectra/Por 1-7）和生物技术级RC膜由柔韧的再生纤维素聚合物制造，可使用任何一种透析膜夹密封。生物技术级CE & PVDF膜由相对刚性的聚合物制造，需要使用相对温和的通用膜夹。鉴于通用膜夹对于所有类型的膜管都能起到很好的密封作用，如不确定选择哪种膜夹合适，使用通用膜夹即可。标准膜夹一般只用于标准级RC膜管。
膜夹的密封宽度一般需比膜管的扁平宽度长4-10 mm。通用膜夹的zui小密封宽度为50 mm。对于所有扁平宽度规格的膜管，均有相应的膜夹可供选择。
