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沪宇生物:简易且能避免污染的细胞培养方法

上海沪宇生物科技有限公司

2019/1/22 10:49:02

培养细胞常规方法需用二氧化碳温箱,且为保持箱内二氧化碳气5%~10%的浓度,需持续输入二氧化碳气体。为此,箱内的培养瓶盖不能拧紧以便二氧化碳气体自由进出。

步,配制1L培养液。培养基中含有酚红指示剂,偏碱时液体为深红或紫色,偏酸时则呈黄色。取配1L培养液的粉剂培养基,加入750ml三蒸水或去离子水,摇匀(一般培养液呈橘红色);再加入碳酸氢钠1~1.1g,至*溶解(呈深红色);后再加三蒸水或去离子水至1L止。

第二步,插吸管于配好的培养液内,通入二氧化碳气体。随着二氧化碳气的融人,液体逐渐变成黄色。用一次性0.22 m孔径的滤膜于正压情况下将该液体过滤除菌。在此过程中,由于部分二氧化碳气体溢出,液体渐成橘黄色。此时迅速将其分装到4个250ml的瓶内,一定塞严或拧紧瓶。在无菌情况下取样本数毫升,37。c无菌培养72h,确定该批培养液无污染后方可使用。常使用的培养液存放于4℃冰箱内,其它暂时不用的可放入一20。c冰箱内保存。

第三步,根据不同细胞系的需求添加不同量血清和抗生素。将配好的培养液吸入小培养瓶内,再将适量细胞吸入,塞严或拧紧瓶盖,置37。c普通隔水式恒温箱内即可。操作过程中因有少量二氧化碳气体溢出,液体呈橘红色,酸碱度(pH) 约为7.0~7.2。如果细胞较少或者生长较慢,液体的pH值似宜偏酸些为好。

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