鼠尾胶原蛋白说明书（*）

包装规格

产品说明

本公司销售的鼠尾胶原蛋白 I型（rat tail tendon collagen type I）是通过 Birkedal-Hansen¹ 的方法，通过醋酸抽提、氯化钠沉淀、磷酸氢二钠沉淀等步骤制备的。

鼠尾胶原蛋白可用于包被细胞培养器皿，培养一些在普通细胞培养器皿中不易贴壁的细胞。也可用于制备三维胶，模拟真实的生长环境，使细胞在三维环境中生长。

鼠尾胶原蛋白包被的
培养皿中生长的 PC-12 细胞

鼠尾胶原蛋白三维胶中
生长的 NIH-3T3 细胞（接种后 5天）

和Sigma鼠尾胶原蛋白（cat# C7661）
SDS-PAGE 电泳对比。
A: Sigma B：我们销售的产品

使用方法

1、细胞培养器皿的表面包被 推荐浓度： 1-5ug/cm²

以包被浓度为 2 ug/cm2 为例：

用无菌0.006mol/L（0.36g/L） 乙酸将胶原蛋白稀释到0.012mg/ml。按表 （一）体积加到相应的培养器皿中：

确保胶原蛋白溶液铺满器皿的表面，开盖在超净台上过夜晾干。 也可以在室温放置 1小时后，用PBS洗3-4次后直接使用。

包被好的器皿在 4-25℃至少可保存3个月以上的时间。

2、三维胶原的制备

鼠尾胶原蛋白I型在浓度1mg/ml以上，pH 7左右时可形成具有一定强度三维胶,建议成胶浓度1-2mg/ml。胶原蛋白溶解于0.006mol/L 乙酸中，在成胶过程中需要加入0.06X 体积的 0.1mol/L NaOH 来中和。

需要的溶液 （ 均需要 无菌 、 预冷 ）: 10xPBS（ 可含10 mg/L的酚红用于 pH 指示 ）或 10x 培养液 , 0.1mol/L NaOH, 0.1mol/L 乙酸（一般不用）, 双蒸水

A．不含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：将200ul鼠尾胶原蛋白I型（5mg/ml）加到置于冰浴的离心管中，加入 690ul H2O。然后加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入100ul 10xPBS或10x培养液，混匀后立即加到培养器皿中（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试）。将培养器皿在室温（25度左右）下放置20分钟待胶凝固后，转移到培养箱内。如果配制中使用的是10xPBS，使用前需要加入适当体积的细胞培养液预平衡。

B．含细胞的三维胶原的制备（以配制1毫升，1mg/ml三维胶为例）：准备好悬浮于培养液的细胞，并放置于冰浴中。将200ul鼠尾胶原蛋白I型 （5mg/ml）加到12ul 0.1mol/L NaOH中（如果反过来把12ul 0.1mol/L NaOH加到胶原溶液中，会由于NaOH不能迅速混匀而产生局部的胶原凝结），立即混匀。再加入23ul 10xPBS或10x培养液，混匀（混匀后pH为7左右，如果PBS或培养液中没有加酚红，初次使用时需要用pH试纸测试）。加入760ul的细胞悬浮液，混匀后立即加到培养器皿中。将培养器皿在室温下放置20分钟待胶凝固后，加入适当体积的细胞培养液，转移到培养箱中培养。

注：鼠尾胶原蛋白I型在室温下pH中性时可迅速成胶，在操作过程中要尽量保持低温。

1 、 Birkedal-Hansen, H. 1987. Catabolism and turnover of collagens: Collagenases. Methods Enzymol. 144 : 140-171.