1 液相色谱仪HPLC测定余甘子中单宁酸的含量实验部分
1. 1 主要仪器与药品
HP21100 安捷伦液相色谱仪 , 包括HP1100 四元泵, 自动进样器,VWD 检测器和色谱工作站;UV 21800紫外可见分光光度计 ,U PW S2IV 2107 超纯水器 , 色谱纯甲醇、超纯水, 单宁酸(A. R. 分子式C76H52O46, 分子量1701. 25) 贵州遵义市第二化工厂, 余甘子(采集于泉州惠安县)。
1. 2 色谱条件
色谱柱为HypersilODS (4. 0×125mm , 5Lm) 色谱柱; VWD 检测器调节检测波长为275nm; 流动相为甲醇和水(体积比80∶20) ; 流速为0. 5mL ·m in- 1; 柱温: 室温; 进样量2LL。
1. 3 样品处理
筛选新鲜的余甘子, 清洗去核, 风干, 称取350. 0g 果肉于搅拌机中捣碎。将捣碎的余甘子果肉用水浸提,得到350. 0mL 提取液。用0. 45Lm 滤膜过滤, 进样2LL。
1. 4 标准溶液的制备
于电子天平上称取0. 0030g 单宁酸(A. R. ) , 用乙醇、水、丙酮体积比为69. 9%、29. 8%、0. 3% 的溶液作溶剂溶解并定容, 制备成浓度为30. 00Lgöm L 的单宁酸标准溶液100mL。上述标准溶液用0. 45Lm 滤膜过滤备用。进样2LL 分析, 在该条件下, 标样和余甘子样品色谱图见图1—2。
2 液相色谱仪HPLC测定余甘子中单宁酸含量的结果与讨论
2. 1 色谱条件选择
用UV 21800 紫外可见分光光度计测得单宁酸在275nm 处有强吸收, 虽然丙酮在275nm 附近也有较大吸收,但不影响单宁酸的分析定量, 故用VWD 检测器调节检测波长为275nm。实验用HypersilODS 色谱柱, 改变流动相(甲醇和水) 配比, 流速, 柱温, 结果表明流动相为甲醇和水(体积比80∶20) ; 流速为0. 5mL ·m in- 1; 柱温: 室温时的出峰情况为*。
2. 2 单宁酸标准溶液溶剂的选择
水、乙醇、丙酮都可用于单宁酸的提取, 为了使本方法的使用范围更广, 分别实验了以水、乙醇、丙酮不同配比的混和溶液作标液的溶剂, 实验结果表明用乙醇、水、丙酮体积比为69. 9%、29. 8%、0. 3% 的溶液作溶剂时出峰情况为*。
2. 3 线性回归方程、相关系数
分别配制单宁酸标准溶液120、150、180、210、240ng/m L 用0. 45Lm滤膜过滤, 进样后得到两种单宁酸的回归方程, 单宁酸1: y = m 1x + b1,m 1= 3. 61220×10- 1, b1= - 12. 62814, r= 0. 99996; 单宁酸2: y =m 2x + b2, m 2 = 3. 30394×10- 1, b2 = - 4. 24693, r= 0. 99998。线性范围为120—240ng/mL。
2. 4 精密度实验
用120ngmL 单宁酸标准溶液, 重复进样4 次, 测定结果见表1。
2. 5 余甘子中单宁酸提取液加标回收率的测定
取已知单宁酸含量的余甘子水提液稀释液5mL , 加入240ngm L 的单宁酸标准溶液5mL , 再用70% 乙醇稀释, 定容至25mL。将以上溶液用0. 45Lm 滤膜过滤, 按2. 2 项色谱条件进行HPLC分析, 测定单宁酸的回收率, 结果见表2。
3液相色谱仪HPLC测定余甘子中单宁酸含量的结论
应用液相色谱法测定余甘子中单宁酸的含量操作简便, 3m in 可完成单次检测, 在120—240ng/mL 的范围内有良好的线性关系, 相关系数达99. 996% 以上, 加标回收率在99. 7% —107. 5% 之间。本方法快速, 方便, 可靠, 可用于多种物质中单宁酸含量的测定。
