人花生四烯酸5脂加氧酶（ALOX-5）ELISA试剂盒

人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA试剂盒双抗体夹心ELISA法定量测定人血清、血浆、组织匀浆、细胞裂解液、细胞培养上清液和其他生物液体含量。

液体类标本：
包括血清，血浆，尿液，胸腹水，脑脊液，细胞培养上清液等。
血清：
室温血液自然凝固10-20分钟后，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中如有沉淀，请再次离心。
血浆：
应根据标本的要求选择EDTA，柠檬酸钠或者肝素作为抗凝剂，混合10-20分钟后，在离心20分钟（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中有沉淀，请再次离心。
尿液：
用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中有沉淀，请再次离心。
细胞培养上清：
检测分泌性的成份时，用无菌管收集，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，当细胞浓度达到100万/ml左右，通过反复冻融，使细胞破坏并释放细胞内的成份，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，如保存过程中有沉淀，请再次离心。
组织标本：
切割标本后，称取重量，加入一定量的PBS（PH7.4），用液氮迅速冷冻保存备用，标本融化后仍保持2-8℃的温度，加入一定量的PBS（PH7.4），用手工或匀浆器将标本匀浆充分，离心20分钟左右（2000-3000转/分），仔细收集上清，分装后留一份待检测，其余冷冻备用。

人花生四烯酸5脂加氧酶(ALOX-5)ELISA试剂盒相关实验研究：

α烯醇化酶基因调节胃癌增殖及其机制研究
摘要：α-烯醇化酶基因(ENO1)是糖酵解过程中的一种代谢酶,催化2-磷酸甘油酸转化磷酸烯醇式丙酮酸。ENO1在多种肿瘤的发生发展中发挥重要作用,但是尚未有研究报道ENO1在胃癌中的作用,因此其在胃癌中的具体功能和发挥作用的分子机制有待深入研究。目的检测ENO1基因在人胃癌组织及癌旁组织中的表达量,研究ENO1基因在胃癌发生发展中的重要生物学功能,并深入探讨其参与胃癌发生发展的机制。方法1.首先通过免疫组织化学染色检测ENO1在胃癌肿瘤组织及癌旁组织中的表达情况,并与TCGA数据库中的结果进行比较;应用Kaplan-Meier法分析ENO1基因表达量与胃癌患者预后的相关性。2.应用RNA干扰技术靶向沉默胃癌细胞株ENO1基因的表达,通过CCK8实验、克隆形成实验、凋亡实验、细胞周期实验及划痕实验检测ENO1对胃癌细胞株生物学功能的影响。3.应用Affymetrix人类全基因表达谱芯片检测ENO1基因干扰前后胃癌细胞株MGC-803中全基因组mRNA表达丰度。
注意事项：
1．酶标板袋拆封后，尽快将不用的板孔放回，并放入干燥剂，保持酶标板干燥。
2．用户在初次使用试剂盒时，应将试剂盒平衡至室温，各种试剂管离心数分钟，以便试剂集中到管底。
3，TMB A液避光保存。
4，洗板过程非常重要，不充分的洗板易导致假阳性。
5．建议所有标准品、样本都做双份检测。
6．请保持试验过程的连续性，禁止酶标板干燥，因干燥会使酶标板上的生物成分迅速失活。
7．为避免交叉污染，要避免重复使用手中的吸头和试管。
8．禁止混用不同批次试剂盒内的试剂。
试验所需自备物品:
1.酶标仪(450nm波长滤光片)
2.37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
3.自动洗板机
4.高精度移液器， EP管及一次性吸头： 0.5-10μL, 2-20μL, 20-200μL, 200-1000μL 5.吸水纸
洗板方法： 手工洗板方法：吸去（不可触及板壁）或甩掉酶标板内的液体；在实验台上铺垫几层吸水纸，酶标板朝下用力拍几次；将推荐的PBt或TBT洗涤缓冲液 至少 0.3ml注入孔内，浸泡1-2分钟。根据需要，重复此过程数次。
自动洗板：如果有自动洗板机，应在熟练使用后再用到正式实验过程中。
样品收集:
1.血清：全血样品于室温放置2小时或4℃过夜后于1000×g离心20分钟，取上清即可检测，收集血液的试管应为一次性的无热原，无内毒素试管。
2.血浆：抗凝剂推荐使用EDTA或肝素，样品采集后30分钟内于1000×g离心15分钟，取上清即可检测。避免使用溶血，高血脂样品。
3.组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。
4.细胞培养上清：取细胞培养上清于1000×g离心20分钟，除去杂质及细胞碎片。取上清检测。
5.其它生物样品：1000×g离心20分钟，取上清即可检测
6.样品应清澈透明，悬浮物应离心去除。
7.样品收集后若在1周内进行检测的可保存于4℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃(1个月内检测)，或-80℃（6个月内检测），避免反复冻融。
结果判断:
1. 以标准品的浓度为横坐标， OD值为纵坐标， 绘制标准曲线。 如有设置复孔，则应取其平均值计算。 以标准品的浓度为横坐标， OD值为纵坐标，绘出标准曲线。亦可以OD值为横坐标，标准品的浓度为纵坐标，绘出标准曲线。
2. 推荐使用专业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或1.4，在软件界面既可根据样品OD值，由标准曲线查出相应的浓度，乘以稀释倍数；亦可将样品的OD值代入标准曲线的拟合方程式，计算出样品浓度，再乘以稀释倍数，即为样品的实际浓度。 1478. 若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测，计算浓度时应乘以稀释倍数。