北京百欧博伟生物技术有限公司
2019/11/13 13:59:58标准菌株验证鉴定步骤!
一、菌种活化:包括干粉标准菌株、标准贮备菌株及工作菌株;
⒈金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,划线接种于营养琼脂平板上,36℃±1℃培养18-24小时。并观察菌落形态。
a.金黄色葡萄球菌:菌落凸起,圆形,不透明;
b.大肠埃希氏菌:菌落稍凸,圆形,湿润,乳白色;
c.铜绿假单胞菌:菌落扁平,圆形,边缘不整齐,光滑湿润,可产生蓝绿或黄绿色素;
d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明,镜检菌体有芽孢。
⒉白色念珠菌:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,划线接种于改良马丁琼脂培养基平板或PDA琼脂平板上,30℃-35℃培养24-48小时。本菌细胞呈卵圆形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5~6倍,革兰氏染色阳性,但着色不均匀。
黑曲霉:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,划线接种于改良马丁琼脂斜面培养基上,23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色,粗糙。
⒊生孢梭菌:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,接种于硫乙醇酸盐流体培养基中,30℃~35℃培养 18-24小时;或在厌氧条件下接种于哥伦比亚琼脂上,30℃~35℃厌氧培养 18-24小时。
二、菌种鉴定:
⒈金黄色葡萄球菌:
革兰氏染色试验:革兰氏阳性菌(紫色),葡萄状排列,球菌。
兔血浆试验:接种1个单菌落于1支兔血浆溶液中,30℃-35℃培养至6小时,每半小时观察一次。凝固为阳性。金黄色葡萄球菌为阳性反应。
⒉大肠埃希氏菌:
革兰氏染色试验:革兰氏阴性杆菌,红色。
IMVC生化试验:
⒊铜绿假单胞菌:
革兰氏染色试验:革兰氏阴性杆菌,红色。
氧化酶试验:将氧化酶试纸用蒸馏水浸湿,用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落,涂在试纸上。在60s内变为蓝色或蓝紫色为阳性,不变色为阴性。
绿脓菌素试验:取斜面培养物接种于 PDP 琼脂培养基斜面上,培养 24 小时,加三氯甲烷 3~5ml 至培养管中,搅碎培养基并充分振摇。静置片刻,将三氯甲烷相移至另一试管中,加入 1mol/L 盐酸试液约 1ml,振摇后,静置片刻,观察。若盐酸溶液呈粉红色,为绿脓菌素试验阳性,否则为阴性。本菌为绿脓菌素试验阳性。
荧光试验:接种于金氏B培养基(或假单胞菌产荧光色素培养基)上,36℃±1℃培养18-24小时,在366nm紫色灯下有蓝绿色荧光。
⒋枯草芽孢杆菌:
菌落形态:表面粗糙不透明,有皱摺。
镜检:用芽孢染色液染色,菌体有芽孢。
⒌白色念珠菌:
革兰氏染色试验:呈卵圆形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5~6倍,革兰氏染色阳性,但着色不均匀。
念球菌显色培养基:30-35℃培养24-48小时,呈绿色菌落。
产芽管试验:挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物,接种于加有一滴血清的载玻片上,盖上盖玻片,置湿润的平皿内,置 35~37℃、1~3 小时,置显微镜下观察,可见到由孢子长出短小芽管。
⒍黑曲霉:
23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色,粗糙,有黑色孢子产生。
⒎生孢梭菌:
革兰氏染色试验:革兰阳性梭菌,有或无卵圆形或球形的芽孢。
哥伦比亚琼脂培养基试验:接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上,置厌氧条件下培养 48~72 小时,应生长。
过氧化氢酶试验:滴加 3%过氧化氢试液,若菌落表面有气泡产生,为过氧化氢酶试验阳性,否则为阴性。本菌为阴性反应。
三、需购买试剂:
菌株 培养基及试剂
金黄色葡萄球菌 HB8278革兰氏染色液试剂盒、HB4117 兔血浆、HB0109-7营养琼脂培养基
大肠埃希氏菌 HBIG13 HBI大肠杆菌生化鉴定条、HB8280甲基红试剂盒、HB8281 V-P试剂盒、HB8279 Kovacs氏靛基质试剂盒
铜绿假单胞菌 HB5187绿脓菌素测定培养基(PDP)、HB2100氧化酶试纸、HB8484假单胞菌产荧光色素培养基
枯草芽孢杆菌 HB8300芽孢染色液
白色念珠菌 HB7015念球菌显色培养基、HB0236-1 1%吐温80-玉米琼脂培养基
黑曲霉 HB4701改良马丁琼脂培养基
生孢梭菌 HB0124-1哥伦比亚琼脂培养基、HB0124-1a硫酸庆大霉素(4mg/支)、HB8650 3%过氧化氢试液
北京百欧博伟生物技术有限公司的中国微生物菌种查询网提供微生物菌种保藏、测序、购买等服务,是中国微生物菌种保藏中心的服务平台,并且是集微生物菌种、菌种,ATCC菌种、细胞、培养基为一体的大型微生物查询类网,自设设备及技术的微生物菌种保藏中心!欢迎广大客户来询!