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标准菌株验证鉴定步骤!

北京百欧博伟生物技术有限公司

2019/11/13 13:59:58

                   标准菌株验证鉴定步骤

 

一、菌种活化包括干粉标准菌株标准贮备菌株工作菌株

金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌标准菌株:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,划线接种于营养琼脂平板上,36℃±1℃培养18-24小时。并观察菌落形态。

a.金黄色葡萄球菌:菌落凸起,圆形,不透明;

b.大肠埃希氏菌:菌落稍凸,圆形,湿润,乳白色;

c.铜绿假单胞菌:菌落扁平,圆形,边缘不整齐,光滑湿润,可产生蓝绿或黄绿色素;

d. 枯草芽孢杆菌: 表面粗糙不透明,镜检菌体有芽孢。

白色念珠菌:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,划线接种于改良马丁琼脂培养基平板或PDA琼脂平板上,30℃-35℃培养24-48小时。本菌细胞呈卵圆形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5~6倍,革兰氏染色阳性,但着色不均匀。

黑曲霉:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,划线接种于改良马丁琼脂斜面培养基上,23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色,粗糙。

生孢梭菌:挑取部分干粉溶解于0.9%无菌氯化钠溶液中,接种于硫乙醇酸盐流体培养基中,30℃~35℃培养 18-24小时;或在厌氧条件下接种于哥伦比亚琼脂上,30℃~35℃厌氧培养 18-24小时。

 

二、菌种鉴定:

⒈金黄色葡萄球菌:

革兰氏染色试验:革兰氏阳性菌(紫色),葡萄状排列,球菌。

兔血浆试验:接种1个单菌落于1支兔血浆溶液中,30℃-35℃培养至6小时,每半小时观察一次。凝固为阳性。金黄色葡萄球菌为阳性反应。

⒉大肠埃希氏菌:

革兰氏染色试验:革兰氏阴性杆菌,红色。

IMVC生化试验:

 

⒊铜绿假单胞菌:

革兰氏染色试验:革兰氏阴性杆菌,红色。

氧化酶试验:将氧化酶试纸用蒸馏水浸湿,用细玻璃棒或一次性接种针挑取单个菌落,涂在试纸上。在60s内变为蓝色或蓝紫色为阳性,不变色为阴性。

绿脓菌素试验:取斜面培养物接种于 PDP 琼脂培养基斜面上,培养 24 小时,加三氯甲烷 3~5ml 至培养管中,搅碎培养基并充分振摇。静置片刻,将三氯甲烷相移至另一试管中,加入 1mol/L 盐酸试液约 1ml,振摇后,静置片刻,观察。若盐酸溶液呈粉红色,为绿脓菌素试验阳性,否则为阴性。本菌为绿脓菌素试验阳性。

荧光试验:接种于金氏B培养基(或假单胞菌产荧光色素培养基)上,36℃±1℃培养18-24小时,在366nm紫色灯下有蓝绿色荧光。

⒋枯草芽孢杆菌:

菌落形态:表面粗糙不透明,有皱摺。

镜检:用芽孢染色液染色,菌体有芽孢。

⒌白色念珠菌:

革兰氏染色试验:呈卵圆形,很象酵母菌,比葡萄球菌大5~6倍,革兰氏染色阳性,但着色不均匀。

念球菌显色培养基:30-35℃培养24-48小时,呈绿色菌落。

产芽管试验:挑取1%吐温80-玉米琼脂培养基上的培养物,接种于加有一滴血清的载玻片上,盖上盖玻片,置湿润的平皿内,置 35~37℃、1~3 小时,置显微镜下观察,可见到由孢子长出短小芽管。

⒍黑曲霉

23℃-28℃培养48-96小时。菌丛呈黑褐色,粗糙,有黑色孢子产生。

⒎生孢梭菌:

革兰氏染色试验:革兰阳性梭菌,有或无卵圆形或球形的芽孢。

哥伦比亚琼脂培养基试验:接种于含庆大霉素的哥伦比亚琼脂培养基平板上,置厌氧条件下培养 48~72 小时,应生长。

过氧化氢酶试验:滴加 3%过氧化氢试液,若菌落表面有气泡产生,为过氧化氢酶试验阳性,否则为阴性。本菌为阴性反应。

 

三、需购买试剂:

菌株                          培养基及试剂

金黄色葡萄球菌    HB8278革兰氏染色液试剂盒、HB4117 兔血浆、HB0109-7营养琼脂培养基

大肠埃希氏菌     HBIG13  HBI大肠杆菌生化鉴定条、HB8280甲基红试剂盒、HB8281 V-P试剂盒、HB8279 Kovacs氏靛基质试剂盒

铜绿假单胞菌     HB5187绿脓菌素测定培养基(PDP)、HB2100氧化酶试纸、HB8484假单胞菌产荧光色素培养基

枯草芽孢杆菌      HB8300芽孢染色液

白色念珠菌      HB7015念球菌显色培养基、HB0236-1 1%吐温80-玉米琼脂培养基

黑曲霉          HB4701改良马丁琼脂培养基

生孢梭菌        HB0124-1哥伦比亚琼脂培养基、HB0124-1a硫酸庆大霉素(4mg/支)、HB8650 3%过氧化氢试液

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