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Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 凋亡检测说明

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2020/11/9 15:54:15

 

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI 凋亡检测试剂盒说明书

 

Annexin V-Alexa Fluor 488/PI Apoptosis Detection Kit 

 

目录号:K2576     

保存:2-8  ℃避光保存 

 

组分说明

 

Cat.No.                      K2576

KitSize                        50

4×BindingBuffer                10ml

PropidiumIodide,PI             500 μl

AnnexinV-AlexaFluor488         250 μl

 

产品简介 

 

   AnnexinV-AlexaFluor488/PI 凋亡检测试剂盒是一种采用AnnexinV-AlexaFluor488 与PI 双染法进行细胞早期凋亡分析的检测试剂盒。

   细胞凋亡早期改变发生在细胞膜表面,这些细胞膜表面的改变之一是磷脂酰丝氨酸(PS)从细胞膜内转移到细胞膜外,使PS暴露在细胞膜外表面。PS是一种带负电荷的磷脂,正常主要存在于细胞膜的内面,在细胞发生凋亡时细胞膜上的这种磷脂分布的不对称性被破坏而使PS暴露在细胞膜外。AnnexinV 具有易于结合到磷脂类如 PS 的特性,对PS有高度的亲和性。因此,该蛋白可充当一敏感的探针检测暴露在细胞膜表面的 PS。PS 转移到细胞膜外不是凋亡所*的,也可发生在细胞坏死中。两种细胞死亡方式间的差别是在凋亡的初始阶段细胞膜是完好的,而细胞坏死在其早期阶段细胞膜的完整性就被破坏。另外一种活细胞非透过性荧光染料碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)不能通过完整的活细胞,但能够对坏死和凋亡晚期的细胞进行染色,因此通常将AnnexinV 与  PI 配合染色,以区别凋亡早期细胞与坏死细胞和凋亡的晚期细胞。

 

注意事项 

 

1.  消化细胞时不能用含EDTA 的胰酶。 

2.  本试剂盒需使用流式细胞仪进行检测。

3.  需自备PBS 和去离子水。

4.  荧光染料均存在淬灭问题,保存和使用过程中请尽量注意避光,以减缓荧光淬灭。

5.  PI 对人体有刺激性,请注意适当防护。

6.  请穿实验服并戴一次性手套操作。

 

操作步骤 

 

1. 细胞样品的准备:

 

    a. 对于贴壁细胞:小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用胰酶消化细胞,至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时,加入前面收集的细胞培养液,吹打下所有的贴壁细胞,并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000×g 左右离心3-5 分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约50μl 左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞,小心吸除上清。再次加入1ml4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。

    b. 对于悬浮细胞:1000×g 左右离心3-5 分钟,沉淀细胞。对于特定的细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清,可以残留约                            50 微升左右的培养液,以避免吸走细胞。加入约1ml 4℃预冷的PBS,重悬细胞,并转移到1.5 毫升离心管内。再次离心沉淀细胞,小心吸除上清,可以残留约                                50μl 左右的   PBS,以避免吸走细胞。再次加入1ml4℃预冷的PBS,重悬细胞,再次离心沉淀细胞。

2. 用去离子水按 1:4 稀释BindingBuffer(4mlBindingBuffer+12ml 去离子水);

3. 用 250μlBindingBuffer 重新悬浮细胞,调节其浓度为 1×106/ml;

4. 取100μl 的细胞悬液于 5ml 流式管中,加入5μlAnnexinV-AlexaFluor488 和             10 μl20μg/ml 的 PI 溶液;

5. 混匀后于室温避光孵育 15 分钟;

6. 在反应管中加 400μlPBS,流式细胞仪(FACS)分析。



 

实验代做服务:

 

免疫组化IHC染色实验服务

细胞、组织TUNEL凋亡染色实验服务

试剂盒免费代检测

实验室代做实验项目

 

透射电镜服务实验服务

石蜡/冰冻切片TUNEL凋亡

核仁组成区嗜银-AGNOR染色实验服务

免疫共沉淀(CHIRP)实验

RNA结合蛋白免疫沉淀(RIP)实验代做

酶联免疫(ELISA)技术服务

鸡传染性法氏囊病病毒VP2抗体诊断试剂盒

喹诺酮类快速检测试剂盒

组织芯片/微阵列定制技术服务

 

染色质免疫沉淀分析(CLIP)实验服务

 

多因子液相芯片技术(Luminex)实验

免疫细胞化学ICC实验服务

ATP/ADP检测实验服务

蛋白双向(2-D)电泳实验服务

蛋白相互作用分析

碱性磷酸酶染色实验服务

PKC活性检测实验

非标定量实验

(Label-free)

 

DIGE技术实验服务

端粒酶活性检测实验

细胞生长曲线的测定

扫描电镜服务

NF-KB p65活性检测实验

 

慢病毒包装实验服务



 

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