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H2S含量测定试剂盒说明书

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2020/12/8 9:51:01

H2S含量测定试剂盒说明书              微量

 

注意:正式测定之前选择预期差异大的样本做预实验

规格: 100T/96S

产品内容:

提取液:液体 100mL×1 瓶,4℃保存。

试剂一:液体 10mL×1  瓶,4℃保存。

试剂:液体 5mL×1 瓶,4℃避光保存。

试剂:液体 5mL×1 瓶,4℃保存。

试剂:液体 1mL×1 管,4℃避光保存。

标准品粉剂 3mg×1 管,4℃避光保存

产品说明:

 

 

H2S 是一种新型气态信号分子,存在于脑内的神经递质,生理浓度的 H2S 对神经系统海马的长时程增强功能具有重要的调节作用,并对自发性高血压、出血性休克及肝硬化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应。

H2S 与醋酸锌、N, N-二甲基对苯二胺和硫酸铁铵等反应生成亚甲基蓝,亚甲基蓝在 665nm 有D吸收峰,通过测定其吸光值可计算 H2S 含量。

需自备的仪器和用品:

天平、低温离心机、可见分光光度计或酶标仪、微量比色皿96孔板、蒸馏水。

操作步骤:

一、样品处理:

a. 组织:按照组织质量g:提取液体积(mL)15~10  的比例建议称取约 0.1g  组织,加入 1mL提取液)进行冰浴匀浆,然后 10000g4℃离心 10min,取上清,置冰上待测。

b. 细菌、真菌:按照细胞数量10 4 :提取液体积mL500~10001 的比例(建议 500 细胞加入 1mL  提取液,冰浴超声波破碎细胞(功率 300w,超声 3  秒,间隔 7 秒,总时间 3min;然后 10000g4℃,离心 10min,取上清置于冰上待测。

c. 血清(浆:直接测定。

、测定步骤: (取 1.5ml 离心管,按照下表操作)

 

空白管

测定管

标准管

样品(μL)

 

50

50

蒸馏水(μL)

50

 

 

d. 临用前将标准品加入1ml试剂一充分溶解则为12.5μmol /mL H2S标准品溶液,稀释100倍后为0.125μmol /mL标准品溶液

 

 

试剂一(μL)

50

50

50

充分震荡混匀

 

试剂二(μL)

50

50

50

充分震荡混匀

试剂三(μL)

50

50

50

充分震荡混匀

试剂四(μL)

10

10

10

12000rpm,4℃,离心 10min,取200μl上清混匀,25℃静置20min,于比色皿中,测定665nm吸光值,记为A空白、A测定、A标准。

三、H2S 含量计算公式:

H2S含量(μmol /mg prot=0.125×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷Cpr

H2S含量(μmol /g)=0.125×(A测定-A空白)÷(A标准-A空白) ÷W

H2S含量(μmol /104 cell)=0.125×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管) ÷细胞数量

H2S含量(μmol /mL)=0.125×(A测定管-A空白管)÷(A标准管-A空白管)

 

 

注意事项:如样本OD值大于标准品OD,可稀释样本或增大标准品浓度

 

 

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