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用鉴定试剂盒做微生物生化鉴定操作流程与注意事项

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2021/5/17 10:00:55

生化鉴定试剂盒HiBio-ID™,试剂盒包含生化鉴定卡、辅助试剂、结果诠释表和标准菌种表。一个生化鉴定卡上集成了12种或24种生化试验,将反应后的显色结果与《结果诠释表》、《菌种标准表》比对后,从而对菌种作出鉴定。

操作流程:

1,准备接种液

①待测菌株需要先分离纯化。只有纯化的菌株才能用于检测。可用普通培养基如营养琼脂(#M001)或适合的鉴别培养基分离菌株。(具体培养基以说明书为准)

②挑取单个菌落,接种到5ml脑心浸出液肉汤,在35-37℃培养4-6小时,直到菌液浊度达到产品说明书上的要求。一些苛养菌可能需要孵育6小时以上。在这种情况下,孵育应使接种液浊度达到OD值或McFarland浊度标准。

③遵循产品说明书的要求操作。

注意:如果接种液浊度<0.1OD或0.5 McFarland标准,可能会得到错误的假阴性结果。

2,接种

①无菌打开试剂盒,撕去密封箔。

②采用表面接种方法,在鉴定卡上每孔加50μl上述接种液。每孔用接种环涂抹接种。

3,孵育

HiBio-ID™生化鉴定卡中,货号为KB001--KB014的产品,均在35℃±2℃培养18-24小时,只有KB006例外,需在室温(22-25℃)孵育48-72小时。

4,试剂

必要时需要添加其他显色试剂,培养结束后,个别微孔需要加入1-2滴显色剂,等待几秒钟或几分钟。颜色发生变化。

5,读取结果

人工读取结果:显色结果与《结果诠释表》比对,确定是否存在阳性反应。再根据《菌种标准表》完成鉴定/或用HiBio-ID™Readers生化鉴定仪鉴定。

注意事项:

1. 试验前,将试剂盒从冰箱取出,放置在室温。

2. 某些菌的糖发酵可能不显著,这时可记录为±,孵育延长至48小时。之后显示为橘黄色则为阴性。

3. 对于赖氨酸和鸟氨酸脱羧试验,孵育可能需要延长至48小时。

4. 如果菌种出现矛盾的结果,可能因为菌种突变或用于分离培养的培养基的缘故。

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