ELISA试剂盒实验在必定温度下的反响时刻并不是反响的结尾，温育时刻过短、温度过低，易致显色不全；温育时刻过长、温度过高，易致非特异性紧附于反响孔周围，难以清洁*，发生阴性高值或假阳性反响。
要严厉按规则的温度和温育时刻进行。如果参加的酶物过多或加在较高的孔壁上或孔口，也会致使本底添加或假阳性。
水浴箱门，严厉控制水浴的温度为37±0.5。同时，微孔板不可堆叠放置，以确保传热均匀，各板的温度都能敏捷到达平衡。
当标本收集保留不妥发生溶血时，红细胞中的血红蛋白释放到血清中，血红蛋白具有过氧化物酶的性质，其通过吸附或“PP效应"（蛋白质间相互吸附的景象）后，可催化A、B液显色而形成假阳性。
因为试剂盒一般设定的反响温度为37度，在这个温度下温育必定时刻，蒸腾的水分会许多，关于全部反响系统来讲，各种反响物的浓度会不断地添加，这么必会致使反响zui终的值添加。
如果ELISA试剂盒样品稀释液少加或血清多加，都会致使本底增高。关于间接法来说，受上述两个因素影响更大。
因为血清中受检的特异性IgG只，IgG中的一小有些。IgG的吸附性很强，非特异性IgG可直接吸附到固相载体上，有时也可吸附到包被抗原的外表。
ELISA试剂盒实验时，这些非特异性的IgG均能够和酶标二抗发作反响而形成较高阴性本底或假阳性。假如参加的血清过多，高于规则的稀释倍数，很容易形成高值阴性。反之，形成假阴性。
