影响ELISA试剂盒测定成果的原因和解决办法

影响ELISA试剂盒测定成果的原因和解决办法

ELISA试剂盒方法被广泛应用于各种抗原和抗体测定，具有灵敏度高，操作简略等优点，但是在详细实验过程中影响要素较多，而且要按照严厉的阐明要求，在临床检验中除正常反响外，有时常可见到一些错误成果（即假阳性或假阴性成果）。
影响ELISA测定错误成果的原因主要有：
①标本要素；
②试剂要素；
③操作要素。
一、类风湿因子
人血清中IgM、IgG型类风湿因子（RF）能够与ELISA系统中的捕获抗体及酶符号二抗的FC段直接结合，然后导致假阳性。
解决办法:
1.用F（ab）2替代完好的IgG；
2.标本用联有热变性（63℃，10 min）IgG的固相吸附剂处理（将热变性IgG加入到标本稀释液中同样有用）；
3.检测抗原时，能够用2-巯基yi醇等加入到标本稀释液中，使RF降解。
二、补体
ELISA系统中固相一抗和符号二抗过程中，抗体分子发作变构，其FC段的补体C1q分子结合位点被暴露出来，使C1q 能够将二者连接起来，然后形成假阳性。
解决办法:
1.用EDTA稀释标本；
2.用53℃，10 min或56℃，30 min加热血清使C1q灭活。
三、嗜异性抗体
人类血清中含有能与啮齿类动物（如鼠等）Ig（s） 结合的天然嗜异性抗体，可将ELISA系统中一抗和二抗连接起来，也能形成假阳性。
解决办法:
可在标本稀释液中加入过量的动物Ig（s），但加入量不足或亚类不同时无效。
四、嗜靶抗原的本身抗体
抗甲状腺球蛋白、抗胰岛素等嗜靶抗原的本身抗体，有时能与靶抗原结合形成复合物，在ELISA方法中均可干扰抗原抗体测定成果。
解决办法:
测定前需用理化方法将其解离后再测定。