肠激酶(Enterokinase，EK，EC3.4.21.9)是一种异源二聚体形式存在于哺乳动物十二指肠内的丝氨酸蛋白酶。它能高效专一性的水解工程菌表达的融合蛋白（识别位点是Asp-Asp-Asp-Asp-Lys）释放出目的蛋白，被广泛用于生物工程制药的开发。牛肠激酶由一条结构亚基（重链）和一条催化亚基（轻链）构成，二者以二硫键结合。据报道，重组肠激酶轻链体外具有全酶的酶切特异性，同时对基因工程融合蛋白底物的酶切活性较提纯的牛肠激酶明显增强。天然肠激酶来源有限，且从动物组织提取的肠激酶易污染其他蛋白，给实际应用带来了困难。这就要求用基因工程方法生产高纯度的肠激酶。重组肠激酶可以切割含有四个天冬氨酸的赖氨酸羧基端肽键：天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-天冬氨酸-赖氨酸（DDDDK）。可以在较宽pH范围（4.5-9.5）和较宽温度范围内有效切割融合蛋白。重组肠激酶可去除位于蛋白质N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签。
常见影响肠激酶活性的因素：
在＞200mM咪唑，或＞200mMNaCl，或＞5%甘油，酶切效果受影响。可参照以下推荐方法进行酶切：
1）为获得理想酶切结果，请将样品透析到25mMTris-HCl8.0缓冲液中，再进行酶切。
2）若不便透析，可将样品稀释，咪唑含量在100mM以下，NaCl浓度在50mM以下，甘油浓度小于5%以下进行酶切，酶的用量与蛋白的比例不变（即1U酶切500µg蛋白）。
3）如果样品溶液中含有上述成分中的一种或多种，且不便去除，此时适当增加酶量或延长酶切时间，也可达到较好酶切效果。
