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Kromasil 色谱柱的使用与维护

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2022/8/27 12:34:00

Kromasil 色谱柱的使用与维护

 

 

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色谱柱安装与平衡

使用经过滤并脱气的流动相( 不含任何缓冲液) *冲洗HPLC 泵和管线,确保系统中没有气泡。按照流向标签( 位于色谱柱上) 指示的方向将色谱柱一端连接至进样器,另一端不接检测器。将泵流速设置为0.1 mL/min( 或系统允许zui低设置) 并在5 分钟内增大至正常流速。

当色谱柱出口处有溶剂自由流出时停止泵送,擦拭出口端并将其连接到检测器。

以正常流速和约10-30 倍色谱柱体积的流动相来平衡色谱柱。

 

检测柱效

强烈建议用户在收到Kromasil 原装jin口色谱柱15 天内进行柱效检测,并在整个使用周期内,

进行定期的柱效测试,以便随时监测色谱柱的寿命情况。

 

运行参数

5 μm 3.5 μm 色谱柱最大耐受压力400 Bar2.5 μm 1.8 μm 色谱柱最大耐受压力1000 bar。最高工作温度不高于60 ℃。在使用Kromasil Classic 系列C18C8C4Phenyl

色谱柱时,流动相pH 控制在1.5-9.5 之间,这样有利于延长色谱柱的使用寿命。

 

流动相的配置

仅使用HPLC 色谱纯溶剂、水、最高纯度的化学品和试剂。

使用前对所有流动相进行过滤和脱气。

确保溶剂可互溶。

 

色谱柱的保存

色谱柱使用完毕后,应尽可能地冲洗掉残留在色谱柱内的杂质和沉积物。保存在适合的储存溶剂中,储存溶剂可以参考COA 中建议使用溶剂。储存环境需保持温度稳定、避光,并注意检查Peek堵头,防止松动导致柱内溶剂流失。

 

色谱柱的清洗

柱压升高,保留时间变化和柱效降低都是色谱柱被污染的表现。

多数情况下,通过正确的冲洗能够解决上述问题。我们需要谨记的是越早冲洗或再生越会更容易的解决上述问题。

 

通常具有较强吸附的杂质都集中在色谱柱进口一端,zui简单的方法是对色谱柱进行反冲。反冲的方法只对填装紧密的色谱柱有效,柱性能也不会发生变化。

 

反冲时,请按照下述的一般步骤,使用特定溶剂对色谱柱进行清洗,并根据不同厂商的建议进行,以免损坏色谱柱。

 

反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1,

Phenyl,   PhenylHexyl)

未键合的硅胶柱(SIL)

使用10 倍柱体积的如下溶剂依次清洗

a. : 乙腈=95:5

b. 四氢呋喃

c. 乙腈: =95:5

d. 不含盐的流动相

e. 流动相

使用10 倍柱体积的如下溶剂依次清洗

a. 异丙醇

b. 甲醇

c. 乙酸乙酯

d. 流动相

键合正相柱(CN, Diol)

用于蛋白/ 多肽分析的反相柱(C18,

C18(w),   C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl)

使用10 倍柱体积的如下溶剂依次清洗

a. 三氯jia烷

b. 异丙醇

c. 二氯甲烷

d. 流动相

a. 使用20 倍柱体积的不含盐流动相进行清洗

b. 梯度清洗

流动相A: 0.1%TFA 水溶液 : 乙腈=95 : 5流动相B: 0.1%TFA 乙腈: 异丙醇=1 : 2

30 min 内,B 相从25% 升至100% 进行清洗,运行2 个梯度程序。

c. 流动相平衡,切勿将色谱柱保存在TFA

 

反冲时,请将流动相流速将至正常流速的1/10-1/5, 并断开检测器。反冲时,请将流动相流速将至正常流速的1/10-1/5, 并断开检测器。

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Kromasil 保护柱

色谱柱一旦污染,冲洗过程将非常耗时,建议使用保护柱减少对色谱柱的污染,

Kromasil 保护柱 :

Kromasil 色谱柱具有相同的填料,*佳保护色谱柱,同时不影响分析结果。

柱芯柱套式设计,成本低。

 

部分常规保护柱订货信息

货号

描述

00000HHO

2.1-4.6 mm guard holder

00000KCO

2.1-21.2 mm guard coupler

M05CLNGC

Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CLNSK

Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05CMNGC

Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CMNSK

Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05CSNGC

Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05CSNSK

Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05NHNGC

Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05NHNSK

Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05PHNGC

Kromasil 100 -5 -Phenyl 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

M05PHNSK

Kromasil 100-5 -Phenyl 3.0-4.6mm guard starter kit

S05CNNGC

Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

S05CNNSK

Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mmguard starter kit

M05SINGC

Kromasil 100-5 -SIL 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack)

M05SINSK

Kromasil 100 -5 -SIL 3.0-4.6 mm guard starter kit

S05DINGC

Kromasil 60-5 - Diol 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack)

S05DINSK

Kromasil 60 -5 -Diol 3.0-4.6 mm guard starter kit

 

 

 

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