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Camtag蛋白小鼠单克隆抗体

受欢迎的加载控制 ATP1A1(Na，K-ATP 酶 α1) β 肌动蛋白和 β 微管蛋白 COX IV 和 VDAC1GAPDHHistone H3和 Lamin B1ProductsAnti-β 肌动蛋白小鼠 mAb 加载控制目录号 AT0001测试应用程序 WB: 1/1000。预测分子量: 42kDa。尚未在其他应用程序中测试。最佳稀释度/浓度应由最终用户确定。反应性小鼠，大鼠，人

抗β-肌动蛋白小鼠单克隆抗体加载控制目录编号: AT0001Actin 是一种普遍存在的真核蛋白，是细胞骨架的主要组成部分。哺乳动物中至少有六种同种型。非肌肉 β-肌动蛋白和 γ-肌动蛋白也称为细胞质肌动蛋白，主要在非肌肉细胞中表达，控制细胞结构和运动。Α-心肌肌动蛋白和 α-骨骼肌肌动蛋白分别在横纹心肌和骨骼肌中表达，平滑肌肌动蛋白 α-和 γ-肌动蛋白分别主要存在于血管平滑肌和肠平滑肌中。

大小: 100μL 浓度: 1毫克/毫克可用性: 库存概述/小鼠对 β-肌动蛋白的单克隆抗体[7G6]-加载控制反应性小鼠，大鼠，人体测试应用/WB: 1/1000。预测分子量: 42kDa。尚未在其他应用程序中测试。最佳稀释度/浓度应由最终用户确定。产品图片这种抗体检测内源性 β-肌动蛋白水平。单克隆号: 7G6同种型小鼠 IgG1Form 液，1mg/mL 小鼠单克隆免疫球蛋白100μg，pH7.3(+/-0.1) ，50% 甘油，0.1 mg/mL BSA (IgG，无蛋白酶)作为稳定剂，0.02% 氮化钠作为防腐剂。贮存指引短期(1-2星期)贮存在摄氏4度以下。配料及贮存在摄氏零下20度，避免冷冻/解冻循环。数据库链接 SwissProt: P60709 Human，SwissProt: P60710 Mouse，SwissProt: P60711 RatHostMouse 所有泳道: 1:1000泳道的抗 β 肌动蛋白抗体1: HelaLanes2: NIH3T3Lanes3: PC-12推荐的二抗: 山羊抗小鼠 IgG-HRP (Engibody，目录号: AT0098)推荐的 ECL: ECL Pico-DetectTM Western 化学发光 HRP 底物(Engibody，目录号: IF6747) 在0.5 mL 冰冷的细胞裂解缓冲液中裂解大约107个细胞(下面提供的制剂)。该缓冲液是一种修饰的 RIPA 缓冲液，适用于回收大多数蛋白质，包括膜受体、细胞骨架相关蛋白和可溶性蛋白。这种细胞裂解缓冲制剂可作为一个单独的产品，需要补充蛋白酶抑制剂立即使用前(猫。# FNN0011，温度计)。其他细胞裂解缓冲液制剂，如 Laemmli 样品缓冲液和 Triton-X 100缓冲液，也与本程序兼容。对于每个特定的应用，可能需要对细胞刺激方案和细胞裂解过程进行额外的优化。将裂解物以14,000 x g 离心10分钟，清除细胞碎片。或者，裂解物可以在100,000 x g 下超离心30分钟以获得更大的澄清。小心地将澄清的细胞裂解物倒入干净的试管中，并用合适的方法测定蛋白质浓度，如布拉德福德试验。建议使用聚丙烯管储存细胞裂解物。用等体积的2xLaemmli 样品缓冲液(125mM Tris，pH6.8,10% 甘油，10% sDS，0.006% 溴酚蓝和130mM 二硫苏糖醇[ dTT ])反应裂解物的等分试样，并在100 °C 下将混合物煮沸90秒。将10 ~ 30μg 的细胞裂解物加入适当的单一百分比或梯度微凝胶孔中，用 SDS-PAGE 电泳分离蛋白质。在准备西药转移时，切一块比凝胶稍大的 PVDF。膜在甲醇中浸泡1分钟，然后用 DDH2O 冲洗5分钟。或者，可以使用硝化纤维素。在转移缓冲液(配方如下)中浸泡薄膜、2片 Whatman 纸和 Western 仪器海绵2分钟。将凝胶和薄膜组装到夹层装置中。将蛋白质以140mA 的温度在室温下转移6 ° C 0-90分钟。转移后，用 Tris 缓冲盐水冲洗膜2分钟。用封闭缓冲液(配方如下)在4 °C 下封闭膜过夜，或在室温下封闭膜一小时。在补充有1% 无 Ig BSA 和0.1% 吐温 -20的 Tris 缓冲盐水中以1:1000起始稀释度将封闭的印迹与一抗在4 °C 孵育过夜或在室温下孵育2小时。用添加0.1% 吐温20的 Tris 缓冲盐水洗涤印迹。使用合适的第二抗体，如山羊抗兔 IgG 结合的 HRP (Cat。# AT0097-100ul，Engibody)或山羊抗小鼠 IgG 结合 HRP (Cat。# AT0098-100ul，Engibody)与您的化学发光试剂和仪器一起使用。故障排除指南西部印迹故障排除1。没有信号。高背景3。非特定波段4。波段大小错误5。黑色/灰色污点上的白色条纹6。“抹黑”1。故障排除: 无信号样品准备•未经测试的物种？积极控制。检查校准。‧样本中或凝胶上的抗原不足。转移到膜上•转移不良。‧过度清洗。阻塞•太多阻塞。优化封闭剂、浓度和时间•交叉反应封闭剂/抗体。抗体孵化和检测•抗体不足。‧第二抗体不正确。•检测试剂盒旧基质无效。膜的选择。阻塞•需要阻塞更长时间。•优化封堵剂、浓度。•封闭剂与一级或二级封闭剂之间的交叉反应。‧磷酸化特异性蛋白质: 使用酪蛋白阻断。抗体孵化和检测•一级抗体浓度过高。‧孵化温度过高。细胞系可以积累不同的蛋白质表达谱。•蛋白质有多种修饰形式，改变了流动性。目标蛋白质成片段-被蛋白酶降解或切割。•剪接变体/同种型或可能来自同一家族的蛋白质。‧蛋白质的多聚体(二聚体)(还原和变性)。•乐队可能不是特定的。运行无主控制阻塞•阻塞不足。优化注意力，时间。抗体孵化和检测•一级或二级抗体浓度过高。抗体尚未提纯。除非在数据表中另有说明，否则确保样品被减少和变性。•检查异构体。•样本是否为重组片段？这些将运行在不同的大小。过多的一抗和/或过多的二抗。超载，蛋白质降解。

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