支原体在自然界广泛存在,尤其可以寄生于人、哺乳动物、植物、昆虫等物种。人的口腔、鼻腔、皮肤、呼吸道等均可携带支原体。在细胞间里,支原体对培养细胞的污染风险不容忽视,这不仅因为常规的抗生素对支原体无效,而且因为污染早期也没有显著表现。一旦发生污染,支原体会影响细胞基因表达和营养代谢改变,严重干扰实验结果(包括细胞转染和病毒包被)。可以使用支原体清除剂。支原体清除剂的工作浓度:
1.将支原体清除剂添加到被支原体污染的细胞培养物中,浓度建议为5g/ml,并培养1周;
2.只有当推荐浓度对去除支原体无效时,才能将支原体去除剂浓度提高至10g/ml;
3.对于培养基更换或培养物转移(传代),使用含有相同浓度支原体清除剂的培养基;
4.在不使用支原体清除剂的情况下转移细胞培养物数次,并确认污染支原体没有再生。
支原体清除剂的细胞毒性较低,但是,当用支原体去除剂处理时,高度受支原体污染的细胞培养物可能会表现出细胞特性的改变或对细胞毒性抗生素的敏感性,因此,在这些情况下,建议在处理后检查预期的细胞特性。