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蛋白表达纯化的方法主要可以分为三类沉淀、离心和层析三种

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2023/2/9 16:55:50
  蛋白表达纯化中的表达是指用模式生物如细菌、酵母、动物细胞或者植物细胞表达外源基因蛋白的一种分子生物学技术。纯化是指利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其它蛋白中纯化出来的一种生物化学方法。蛋白质量表征是指通过表征蛋白质的二级结构、热稳定性以及聚集态等信息来评估所获取蛋白质量的一种物理化学方法。
  蛋白表达纯化的方法主要可以分为三类沉淀、离心和层析。具体可以分为:
  盐析沉淀是在蛋白质水溶液中加入中性盐,随着盐浓度增大而使蛋白质沉淀出来的方法。等电点沉淀是利用蛋白质在等电点时溶解度低而不同蛋白质又具有不同等电点的特点进行分离的方法。有机溶剂沉淀是利用与水互溶的有机溶剂使蛋白质在水中的溶解度显著降低而沉淀的方法。
  速率区带离心是根据颗粒在介质中的沉降速度不同来分离试样的方法。差速离心是逐渐提高离心速度来分离不同大小的细胞器的方法。
  疏水相互影响层析是利用蛋白质表面的疏水部位和固定相上的疏水基团的结合来分离不同蛋白质的方法。凝胶层析是利用混合物随流动性相流过配有凝胶固定不动相的层析柱时速度不一致而分离的方法。由于存在特异性低、纯化蛋白纯度不高和活性低等缺点,在实际生产中用的频次比较低。应用较多的纯化方法是层析法中的亲和层析和离子交换层析。

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