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2023/7/7 15:12:04特色方案
食品中维生素B12的测定
维生素B12又叫钴胺素,是含有必须矿物质的维生素,广泛存在于动物食品中。维生素B12参与制造骨髓红细胞,具有防止恶性贫血的作用。消化道疾病者容易缺乏维生素B12,应当注意饮食平衡,并适当口服维生素B12予以补充。SHIMSEN 维生素B12免疫亲和柱能够特异地富集样品中的维生素B12,广泛应用于乳制品、婴儿配方奶粉及饮料等食品样品的前处理步骤。
1. 提取
维生素B12标准品:
380-04112-S,Vitamin B12
维生素B12同位素内标:
380-04412-IS,[13C7]-Vitamin B12
准确称取混合均匀的样品2.0 g(精确至0.01g)于50 mL离心管中,加入20 mL去离子水溶液,涡旋10 min,
超声15 min。于8000 r/min下离心10 min,移取4 mL上清液,待净化。
2. 净化
SHIMSEN 维生素B12免疫亲和柱,1000ng/3mL(货号:380-00930-03)
(1)活化:加压排出免疫亲和柱中的保护液,弃去流出液;
(2)上样:准确移取上清液4 mL加入免疫亲和柱中,弃去流出液;
(3)清洗:当上样液的液面下降到免疫亲和柱中的管体处时(未全流干时),向柱中加入10 mL水,弃去流出液,于负压装置(货号:RT-26077)中将小柱抽干;
(4)洗脱:关闭负压装置阀门,向柱中加入2 mL甲醇,静置2-3 min,打开阀门,收集流出液。
(5)重新溶解:向洗脱液中加入50 µL 0.1%甲酸水,于50-60℃氮吹至近干;再加入1 mL 0.1%甲酸水涡旋混匀,过0.22 µm尼龙滤膜(货号:380-00321),待检测。
注意:
① 实验中应控制柱流速不要超过1 mL/min;
② 免疫亲和柱于2-8 ℃储存,不可冷冻,使用前需要恢复到室温。
附:参考方法
食品中维生素B12的测定 参考标准GB 5009.285-2022 第二法