高压蒸汽灭菌法（autoclaving） 可杀灭包括芽胞在内的所有微生物，是灭菌效果好、应用广的灭菌方法。方法是将需灭菌的物品放在高压锅（autoclave）内，加热时蒸汽不外溢，高压锅内温度随着蒸汽压的增加而升高。在103.4kPa（1.05kg/cm2）蒸汽压下，温度达到121.3℃，维持15～20分钟。适用于普通培养基、生理盐水、手术、玻璃容器及注射器、敷料等物品的灭菌。
有下排式压力蒸汽灭菌器和预真空压力蒸汽灭菌器两大类。下排式压力蒸汽灭菌器又包括手提式和卧式两种。 （1）下排气压力蒸汽灭菌器，下部有排气孔，灭菌时利用冷热空气的比重差异，借助容器上部的蒸汽压迫使冷空气自底部排气孔排出。灭菌所需的温度、压力和时间根据灭菌器类型、物品性质、包装大小而有所差别。当压力在102.97～137.30kPa时，温度可达121～126℃，15～30分钟可达到灭菌目的。
（2）预真空压力蒸汽灭菌器，配有真空泵，在通入蒸汽前先将内部抽成真空，形成负压，以利蒸汽穿透。在压力105.95kPa时，温度达132℃，4～5min即可灭菌。
（1）灭菌包不宜过大过紧（体积不应大于30cm×30cm×30cm），灭菌器内物品的放置总量不应超过灭菌器柜室容积的85%。各包之间留有空隙，以便于蒸汽流通、渗入包裹中央，排气时蒸汽迅速排出，保持物品干燥。
（2）盛装物品的容器应有孔，若无孔，应将容器盖打开。
（3）布类物品放在金属、搪瓷类物品之上。
（4）被灭菌物品应待干燥后才能取出备用。
（5）灭菌锅密闭前，应将冷空气充分排空。
（6）随时观察压力及温度情况。
（7）注意安全操作，每次灭菌前，应检查灭菌器是否处于良好的工作状态。
（8）灭菌完毕后减压不要过猛，压力表回归“0”位后才可打开盖或门。
