这些常用的标注工具你用过吗？

抗体或蛋白质标记是指将目标物质（酶、荧光素、生物素）与抗体或其他蛋白质共价连接，并与生成测试物质发生特异性反应，形成多重复合物。借助荧光显微镜、射线测量仪、酶标检测仪、电子显微镜、发光免疫分析仪等精密仪器，可通过显微镜直接观察检测结果或在细胞、亚细胞、超微结构、分子水平上自动测定检测结果。对抗原和抗体反应进行定性和定位研究，或应用各种液相和固相免疫分析方法定性和定量测定体液中的半抗原和抗原。现在，抗体标记技术已广泛应用于医学病理学、免疫组织化学、分子生物学、生物制药等领域的分析研究和技术测定。常见的抗体标记技术包括酶标记、生物素化标记和荧光素标记。

常用的抗体/蛋白质标记技术

1. 酶标记

通过合适的方法将酶与抗体或蛋白质共价键合，制成酶标记抗体。然后，通过酶对底物的特异催化作用，生成有色不相容产物或具有一定电子密度的颗粒。这些有色产物可用肉眼、光学显微镜、电子显微镜观察。也可以用分光光度计来测量。颜色反应表明酶的存在，证明相应的免疫反应已经发生。

蛋白质-蛋白质缀合通常使用双功能接头交联剂进行。交联剂（NHS酯）的一端与氨基酸赖氨酸和N端的胺（-NH2）反应，另一端（马来酰亚胺胺）与硫醇基（-SH）反应存在于氨基酸中。然而，SMCC 修饰的蛋白质极其不稳定，并且通常会发生自身反应。

2. 生物素标记

亲和素和生物素可以与蛋白质（抗原、抗体、酶）、荧光剂和其他分子结合，而不影响后者的生物活性。是一种理想的标记剂。一个抗体分子可与数十个生物素或亲和素分子偶联，亲和素或生物素分子可与酶或荧光素结合形成生物放大系统，显着提高检测的灵敏度。常用的有亲和素-生物素标记法、亲和素-生物素桥法、亲和素-生物素-过氧化物酶复合物法。

3. 荧光标记

染料与蛋白质的结合需要染料与蛋白质之间形成稳定的共价键，并且这种共价键在大多数情况下都不能断裂。与蛋白质固有的荧光相比，小型有机染料在选择标记位点和增强荧光方面具有更大的灵活性，已广泛应用于蛋白质标记。用适当的荧光染料标记后，蛋白质可以在各种生物过程中可视化，以便可以在生化测定中量化或定位在细胞研究中心。染料-蛋白质缀合物已成为研究酶活性、蛋白质相互作用、构象变化以及调节和观察特定生物过程的非常重要的工具。它们已广泛应用于 ELISA、蛋白质印迹、流式细胞术和细胞成像。