当PH值为7-9时，不需要偶联剂，PEG胺能与NHS酯有效反应。
(1)将含有小分子的胺缓慢溶解在有机溶剂中，如DMF、CH2Cl2、DMSO、THF或其他溶剂。
(2)根据反应动力学，在连续搅拌下将含NHS的化合物以1:1或2:1当量mmol添加到反应混合物中。
(3)根据底物的性质搅拌反应混合物3-24小时，并通过LC-MS或TLC板监测。
(4)最终产物可以通过常规的有机合成或柱纯化来分离。
比例1:1当量
偶联剂可以是EDC、DCC、HATU。 EDC 交联在酸性 (pH 4.5) 条件下很有效。
(1)开瓶前将EDC和羧酸保持至室温。
(2) 将 100mg 每种试剂（约 100μL）溶解在所需量的可与水混溶的无水溶剂（如 DMF 或 DMSO）中，制备羧酸储备溶液。
(3)将适量的EDC和含胺分子加入适量的活化缓冲液中的羧化表面，并在室温下反应15分钟。
(4)加入DTT猝灭EDC。注意：对于易于清洁的表面，可以跳过淬火步骤，并用偶联缓冲液清洗表面，以去除任何残留的 EDC 和 NHS。
(5)将缀合物缓冲液中制备的羧酸混合物添加至活化的表面并在室温下反应2小时。
(6) 加入羟胺或另一种含胺缓冲液以猝灭反应。羟胺水解固体表面上未反应的 NHS 并形成羟基盐。其他猝灭方法包括添加三聚氰胺、赖氨酸、甘氨酸或乙醇胺；然而，这些含伯胺的化合物可以修饰羧基。 （注：新引入的羧基可以通过重复步骤4和5进一步修饰）
(7) 将偶联缓冲液中制备的所需含胺底物添加到活化的表面，并在室温下反应2小时。
(8) 按照步骤7所述猝灭反应。
